| 主权项 |
1.一种重组腺病毒表现载体,其特征为不具有表现 腺病毒蛋白质IX DNA之能力,却具有表现外来基因之 能力,其中该载体包含: (a)一外源DNA之插入子,其包含编码一外来蛋白质之 基因,该外来蛋白质为肿瘤压抑子蛋白质或一自杀 性蛋白质; (b)腺病毒DNA,其保有始自第357个核酸及终于4020 至4050个核酸之删除;及 (c)人类巨噬细胞病毒(CMV)起动子,或腺病毒起动子 。2.根据申请专利范围第1项之重组腺病毒表现载 体,其中该腺病毒系选自血清型1.2.5及6之C群腺病 毒。3.根据申请专利范围第1项之重组腺病毒表现 载体,其中该重组腺病毒表现载体之总长度少于35 仟硷基。4.根据申请专利范围第1项之重组腺病毒 表现载体,其中该插入子系少于4.5仟硷基。5.根据 申请专利范围第1项之重组腺病毒表现载体,其中 该插入子包含一外源聚核化讯号。6.根据申请 专利范围第1项之重组腺病毒表现载体,其中该肿 瘤压抑子蛋白质是P53。7.根据申请专利范围第1项 之重组腺病毒表现载体,其中该肿瘤压抑子蛋白质 是RB56。8.根据申请专利范围第1项之重组腺病毒表 现载体,其中编码该外来蛋白质之基因是在巨噬细 胞病毒(CMV)起动子之控制下表现。9.根据申请专利 范围第8项之重组腺病毒表现载体,其中该CMV起动 子是CMV上早期起动子(immediate early promoter)。10.根 据申请专利范围第1项之重组腺病毒表现载体,其 中编码该外来蛋白质之基因系在腺病毒起动子控 制下表现。11.根据申请专利范围第10项之重组腺 病毒表现载体,其中该腺病毒起动子是腺病毒2主 要后期起动子。12.根据申请专利范围第1项之重组 腺病毒表现载体,其中该载体为A/C/N/53。13.根据申 请专利范围第1项之重组腺病毒表现载体,其中该 载体为A/M/N/53。14.一种重组腺病毒表现载体,其特 征为不具有表现腺病毒蛋白质IX DNA之能力,却具有 表现外来基因之能力,其中该载体包含: (a)一外源DNA之插入子,其包含编码一外来蛋白质之 基因,该外来蛋白质为一肿瘤压抑子蛋白质或一自 杀性蛋白质; (b)腺病毒DNA,其始自第360个核酸及终于第4020至 4050个之腺病毒核酸序列被一非腺病毒之聚核 酸序列取代,及 (c)人类巨噬细胞病毒(CMV)起动子,或腺病毒起动子 。15.根据申请专利范围第14项之重组腺病毒表现 载体,其中该腺病毒系选自血清型1.2.5及6之C群腺 病毒。16.根据申请专利范围第14项之重组腺病毒 表现载体,其中该重组腺病毒表现载体之总长度少 于35仟硷基。17.根据申请专利范围第14项之重组腺 病毒表现载体,其中该插入子系少于4.5仟硷基。18. 根据申请专利范围第14项之重组腺病毒表现载体, 其中该插入子包含一外源聚核化讯号。19.根据 申请专利范围第14项之重组腺病毒表现载体,其中 该肿瘤压抑子蛋白质是P53。20.根据申请专利范围 第14项之重组腺病毒表现载体,其中该肿瘤压抑子 蛋白质是RB56。21.根据申请专利范围第14项之重组 腺病毒表现载体,其中编码该外来蛋白质之基因是 在巨噬细胞病毒(CMV)起动子之控制下表现。22.根 据申请专利范围第21项之重组腺病毒表现载体,其 中该CMV起动子是CMV上早期起动子(immediate early promoter)。23.根据申请专利范围第14项之重组腺病 毒表现载体,其中编码该外来蛋白质之基因系在腺 病毒起动子控制下表现。24.根据申请专利范围第 23项之重组腺病毒表现载体,其中该腺病毒起动子 是腺病毒2主要后期起动子。25.根据申请专利范围 第14项之重组腺病毒表现载体,其中该载体为A/C/N/ 53。26.根据申请专利范围第14项之重组腺病毒表现 载体,其中该载体为A/M/N/53。27.一种经转形之真核 寄主细胞,其包含根据申请专利范围第1项之重组 腺病毒表现载体。28.根据申请专利范围第27项之 转形真核寄主细胞,其中寄主细胞系哺乳类细胞。 29.根据申请专利范围第27项之转形真核寄主细胞, 其中该哺乳类细胞系牛细胞、猪细胞、马细胞、 狗细胞、猫细胞、猴细胞、鼠细胞、大鼠细胞或 人类细胞。30.根据申请专利范围第27项之转形真 核寄主细胞,其中该细胞系肝细胞、肺细胞、乳房 细胞、结肠细胞、直肠细胞、造上皮细胞、膀胱 细胞、卵巢细胞、摄护腺细胞、网状内皮细胞、 骨细胞或食道细胞。31.根据申请专利范围第27项 之转形真核寄主细胞,其中该细胞具赘瘤性质。32. 根据申请专利范围第31项之转形真核寄主细胞,其 中该细胞为一赘瘤细胞,于转形前,缺乏具功能之 肿瘤压抑子蛋白质之特性。33.根据申请专利范围 第32项之转形真核寄主细胞,其中肿瘤压抑子蛋白 质系p53或RB56。34.根据申请专利范围第31项之转形 真核寄主细胞,其中核细胞为一赘瘤细胞,于转形 前,具有无法表现编码肿瘤压抑子蛋白质内因性核 酸之特性。35.根据申请专利范围第34项之转形真 核寄主细胞,其中肿瘤压抑子蛋白质系p53或RB56。36 .根据申请专利范围第31项之转形真核寄主细胞,其 中该细胞为一赘瘤细胞,于转形前,具有无法表现 编码p53内因性核酸之特性。37.一种转形病理上之 过增生哺乳细胞之方法,其包含以根据申请专利范 围第1项之重组腺病毒表现载体与该细胞接触。38. 一种经转形之真核寄主细胞,其包含根据申请专利 范围第14项之重组腺病毒表现载体。39.根据申请 专利范围第38项之转形真核寄主细胞,其中寄主细 胞系哺乳类细胞。40.根据申请专利范围第38项之 转形真核寄主细胞,其中该哺乳类细胞系牛细胞、 猪细胞、马细胞、狗细胞、猫细胞、猴细胞、鼠 细胞、大鼠细胞或人类细胞。41.根据申请专利范 围第38项之转形真核寄主细胞,其中该细胞系肝细 胞、肺细胞、乳房细胞、结肠细胞、直肠细胞、 造上皮细胞、膀胱细胞、卵巢细胞、摄护腺细胞 、网状内皮细胞、骨细胞或食道细胞。42.根据申 请专利范围第38项之转形真核寄主细胞,其中该细 胞具赘瘤性质。43.根据申请专利范围第42项之转 形真核寄主细胞,其中该细胞为一赘瘤细胞,于转 形前,缺乏具功能之肿瘤压抑子蛋白质之特性。44. 根据申请专利范围第43项之转形真核寄主细胞,其 中肿瘤压抑子蛋白质系p53或RB56。45.根据申请专利 范围第42项之转形真核寄主细胞,其中该细胞为一 赘瘤细胞,于转形前,具有无法表现编码肿瘤压抑 子蛋白质内因性核酸之特性。46.根据申请专利范 围第45项之转形真核寄主细胞,其中肿瘤压抑子蛋 白质系p53或RB56。47.根据申请专利范围第42项之转 形真核寄主细胞,其中该细胞为一赘瘤细胞,于转 形前,具有无法表现编码p53内因性核酸之特性。48. 一种转形病理上之过增生哺乳细胞之方法,其包含 以根据申请专利范围第14项之重组腺病毒表现载 体与该细胞接触。49.一种制备重组腺病毒表现载 体之方法,其包含下列步骤: (a)构第一重组腺病毒表现载体,其包含: 1)一外源DNA之插入子,其包含编码一外来蛋白质之 基因;及 2)腺病毒DNA,其中所有E1a,E1b及蛋白质1X,及至少部份 E3之编码序列已被删除; (b)以步骤(a)所得之重组腺病毒表现载体活体外转 形表现E1蛋白质之真核宿主细胞; (c)培养步骤(b)之该转形宿主细胞; (d)由该培养物中分离出其中表现之重组腺病毒表 现载体。50.根据申请专利范围第49项之制备重组 腺病毒表现载体之方法,其中该蛋白质1X多腺化 位置由该腺病毒载体中删除。51.根据申请专利范 围第49项之制备重组腺病毒表现载体之方法,其中 该腺病毒系选自血清型1.2.5及6之C群腺病毒。52.根 据申请专利范围第49项之制备复制不完全之重组 腺病毒表现载体之方法,其中该外源DNA另包含一多 腺化位置。53.一种制备重组腺病毒表现载体之 方法,其包含下列步骤: (a)构筑申请专利范围第1项之重组腺病毒表现载体 ; (b)以步骤(a)所得之重组腺病毒载体活体外转形表 现E1蛋白质之真核宿主细胞; (c)培养步骤(b)之该转形宿主细胞;及 (d)由该培养物中分离出其中表现之该重组腺病毒 载体。54.一种制备重组腺病毒表现载体之方法,其 包含下列步骤: (a)构筑申请专利范围第14项之重组腺病毒表现载 体; (b)以步骤(a)所得之重组腺病毒表现载体活体外转 形表现E1蛋白质之真核宿主细胞; (c)培养步骤(b)之该转形宿主细胞;及 (d)由该培养物中分离出其中表现之该重组腺病毒 载体。55.根据申请专利范围第49.53或54项之制备之 重组腺病毒表现载体之方法,其中该腺病毒为选自 血清型1.2.5及6之C群腺病毒。56.根据申请专利范围 第49.53或54项之制备重组腺病毒表现载体之方法, 其中该外源DNA为高达2.6仟硷基。57.根据申请专利 范围第49.53或54项之制备重组腺病毒表现载体之方 法,其中该外源DNA为高达4.5仟硷基。58.根据申请专 利范围第49.53或54项之制备重组腺病毒表现载体之 方法,其中该外来蛋白质为肿瘤压抑子蛋白质。59. 根据申请专利范围第58项之制备重组腺病毒表现 载体之方法,其中该肿瘤压抑子蛋白质为p53。60.根 据申请专利范围第58项之制备重组腺病毒表现载 体之方法,其中该肿瘤压抑子蛋白质为RB56。61.根 据申请专利范围第49.53或54项之制备重组腺病毒表 现载体之方法,其中该复制不完全之重组腺病毒表 现载体为质体AMNS3,其系于1994年7月9日寄存于中国台湾 食品工业发展研究所,寄存编号为CCRC970002。62.一 种用于基因治疗之医药组合物,其包含一医药上可 接受载体及根据申请专利范围第1至13项中任一项 之重组腺病毒表现载体。63.根据申请专利范围第 62项之医药组合物,另包含一以该重组腺病毒表现 载体转形之宿主细胞。64.根据申请专利范围第62 项之医药组合物,其中该医药上可接受载体系一生 理上可接受化合物。65.根据申请专利范围第62项 之医药组合物,其系用于治疗患有下列肿瘤之哺乳 动物受体: 非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肝癌、黑色素细胞 癌、视网膜母细胞瘤、乳房肿瘤、结直肠癌、白 血病、淋巴癌、脑瘤、子宫颈癌、肌肉瘤、摄护 腺瘤、膀胱瘤、网状内皮细胞之肿瘤、韦恩氏肿 瘤、星状细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤 、卵巢癌、骨肉瘤、及肾癌。66.一种用于基因治 疗之医药组合物,其包含一医药上可接受载体及根 据申请专利范围第14至26项中任一项之重组腺病毒 表现载体。67.根据申请专利范围第66项之医药组 合物,另包含一以该重组腺病毒表现载体转形之宿 主细胞。68.根据申请专利范围第66项之医药组合 物,其中该医药上可接受载体系一生理上可接受化 合物。69.根据申请专利范围第66项之医药组合物, 其系用于治疗患有下列肿瘤之哺乳动物受体: 非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肝癌、黑色素细胞 癌、视网膜母细胞瘤、乳房肿瘤、结直肠癌、白 血病、淋巴癌、脑瘤、子宫颈癌、肌肉瘤、摄护 腺瘤、膀胱瘤、网状内皮细胞之肿瘤、韦恩氏肿 瘤、星状细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤 、卵巢癌、骨肉瘤、及肾癌。图式简单说明: 第一图显示本发明之重组腺病毒载体。 第二图显示p110RB之胺基酸序列。 第三图显示编码视网膜母细胞瘤肿瘤压抑子蛋白 质之DNA序列。 第四图显示属于本发明范围内之重组p53/腺病毒构 筑物之流程图。 第五图A及第五图B显p53蛋白质于以A/M/53或A/C/53感 染之肿瘤细胞内之表现。 第六图A至第六图C显示Saos-2之p53依赖性形态变化 。 第七图显示于人类肿瘤细胞系中,A/M/N/53及A/C/N/53 对DNA合成之p53依赖性抑制。 第八图显示以p53感染之Saos-2细胞于裸鼠体内之肿 瘤形成。 第九图系rAd/p53RNA于已建立肿瘤内之表现。 第十图A及第十图B显示A/M/N/53于活体内对肿瘤之压 抑以及所增加之存活时间。 |
