重组人淋巴毒素α衍生物a的构建与纯化工艺

摘要

本发明的rhL TαDa是以hＬＴα为原型进行结构改造而获得的基因工程产物。其核苷酸序列编码第２６位氨基酸的密码子是ＡＣＣ（Thr）。以原型hL Tα cDNA为模板，经ＰＣＲ扩增获得rhL TαDa cDNA。引物设计的特征是Ｎ端缺失２７个氨基酸，将第２９、３３和３４位氨基酸的密码子设为大肠杆菌偏爱密码子。rhL TαDa在大肠杆菌中以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的６０—８０％。建立了简便、有效的rhL TαDa纯化工艺，得到的rhL TαDa纯度在９５％以上。比活高于２×10＃+[8]ＩＵ／ｍｇ蛋白质。$＃!

主权项

1、一种重组人淋巴素养素α衍生物a的构建方法，包括从人基因文库 中克隆人淋巴毒素α基因，从人T细胞cDNA文库PCR扩增得到编码人 淋巴毒素α成熟蛋白的cDNA和引物设计、克隆、表达重组人淋巴毒素α 衍生物a，其特征在于： 1)编码人淋巴毒素α成熟蛋白的cDNA核苷酸序列中第26位氨基酸 是Thr； 2)PCR扩增重组人淋巴毒素α衍生物acDNA的引物设计如下： N端引物：5’ACACATATGAAACCGGCTGCTCACCTGATCGGA C端引物：5’CCGAATTCTACAGAGCGAAGGCTCCAAAG rhLTαDacDNA与hLTα原型比较，N端缺失27个氨基酸，加上 一个甲硫氨酸密码子，原第29位、33位和34位氨基酸的密码子CCT、CTC 和ATT分别改为大肠杆菌偏爱的密码子CCG、CTG和ATC。