增强核酸分子合成的组合物和方法

摘要

本发明涉及用于增强核酸分子,尤其是富含GC的核酸分子合成的组合物和方法。具体来说,本发明提供了包含一或多种含氮有机化合物(或者其盐或衍生物)的组合物,所述化合物具有选自通式Ⅰ或通式Ⅱ的分子式,优选是4－甲基吗啉－N－氧化物或甜菜碱(羧甲基三甲基铵),该组合物中还包含一或多种选自脯氨酸和N－烷基咪唑化合物的化合物,更优选脯氨酸、1－烷基咪唑或4－烷基咪唑。本发明另外涉及增强高忠实性合成核酸分子的方法,包括经由扩增(尤其是PCR)、反转录以及测序的方法。本发明还涉及由这些方法合成的核酸分子、其片段或衍生物,涉及包含这样的核酸分子、片段或衍生物的载体和宿主细胞。本发明还涉及用于合成、扩增、反转录或测序核酸分子的试剂盒,所述试剂盒中包含一或多种本发明的组合物。

主权项

1、一种用于合成核酸分子的组合物，其中包含一种或多种具有选自式Ⅰ或式Ⅱ的化学式的化合物，或其盐或衍生物：式Ⅰ：其中A是其中X是其中q=1-100,000，其中当q=2-100,000时，每个式Ⅰ单体可以与其他式Ⅰ单体相同或不相同；其中Z可以与Y相同或不同；其中Y和Z各自独立地选自-OH、-NH₂、-SH、-PO₃H、-CO₂H、-SO₃H和氢；其中f为0-2的整数，m为0-20的整数，e为0-2的整数；其中R₄、R₅和R₆可以相同或不同，各自独立地选自氢、烷基、链烯基、炔基、芳基、氨基、硫醇、巯基、卤、硝基、次氮基、羟基、羟基烷基、羟基芳基、磷酸基、烷氧基、氧化物、醚、酯(烷酰氧基)、羧基、羰基、磺酰基、磺基和酰氨基，d为0-2的整数；其中a、b和c各自独立地为0-1的整数，条件是a、b和c中最多有两个为0；其中R₁、R₂和R₃可以相同或不同，各自独立地选自：a)=0；b)其中R₇和W可以相同或不同，各自独立地选自氢、烷基、链烯基、炔基、芳基、氨基、巯基、硫醇、卤、硝基、次氮基、羟基、羟基烷基、羟基芳基、磷酸基、烷氧基、氧化物、醚、酯(烷酰氧基)、羧基、羰基、磺酰基、磺基和酰氨基；g为0-2的整数，n为0-20的整数；式Ⅱ：其中式Ⅱ是饱和或不饱和的；其中q=1-100,000，其中当q=2-100,000时，每个式Ⅱ单体可以与其他式Ⅱ单体彼此相同或不相同；其中X选自N、C、O、P和S；其中Y选自O、N、S、P、C、-O-NH-、-O-CH₂-NH-、-O-CH₂-O-、-NH-CH₂-NH-、-O-CH(CH₃)-NH-、-NH-CH(CH₃)-NH-、-O-CH(CH₃)-O-、-NH-C(CH₃)₂-NH-、-O-S-、-O-CH₂-S-、-NH-S-、-NH-CH₂-S-，以及其他硫醇、磷酸基、烷氧基、氧化物、醚、酯(烷酰氧基)、羧基、磺酰基、磺基和酰氨基；其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇和R₈可以相同或不同，各自独立地选自氢、烷基、链烯基、炔基、芳基、氨基、巯基、硫醇、卤、硝基、次氮基、羟基、羟基烷基、羟基芳基、磷酸基、烷氧基、氧化物、醚、酯(烷酰氧基)、羧基、磺酰基、磺基和酰氨基；并且其中a、b、c、d、e、m、n和o是相同或不同的整数，a、b、c、d和e各自独立地选自0-2，m、n和o各自独立地选自0-5。