VECTORS AND METHOD FOR PRODUCING RECOMBINANT PROTEINS IN FUNGI

摘要

Die Erfindung betrifft Integrationsvektoren zur gezielten und stabilen Integration heterologer DNA in das Genom eines Wirtsorganismus, insbesondere eines Pilzes, und ihre Verwendung. Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines oder mehrerer rekombinanter Proteine unter Verwendung der erfindungsgemässen Vektoren. Aufgabe der Erfindung ist es, Integrationsvektoren bereitzustellen, die es erlauben, Fremd-DNA in hoher Kopienzahl in das Genom eines Wirtsorganismus stabil zu integrieren und bei Bedarf unterschiedliche Gene für eine simultane Koproduktion verschiedener Proteine zu exprimieren. Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist es, stabile Produktionsstämme und ein Verfahren zur Herstellung heterologer Proteine bereitzustellen. Diese Aufgabe wird durch einen Integrationsvektor gelöst, welcher: a) mindestens eine rDNA-Sequenz aus Hefe, b) mindestens ein nicht-defizientes Selektionsmarkergen und c) mindestens eine Expressionskassette umfasst, wobei die Expressionskassette ein im Wirtsorganismus funktionsfähiges Promotorelement, einen für ein gewünschtes Protein kodierenden Bereich eines heterologen oder genuinen Genes und ein im Wirtsorganismus funktionsfähiges Terminatorelement umfasst. Von der Erfindung wird ebenfalls ein Wirtsorganismus umfasst, der mindestens einen erfindungsgemässen Vektor enthält. Ein bevorzugter Wirtsorganismus ist die methylotrophe Hefe Hansenula polymorpha.