| 主权项 |
1.一种具有血小板生成素(thrombopoietin, TPO)活性之 蛋白质,其相对于SEQ ID NO:16位置1-332或1-163之胺基 酸序列,具有至少一种选自下示(a)至(u)之取代、删 除、插入或增加; (a)位置25之Arg残基经Asn残基所取代; (b)位置33之His残基经Thr残基所取代; (c)位置25之Arg残基及位置231之Glu残基分别经Asn及 Lys残基所取代; (d)位置33之His残基经删除; (e)位置116之Gly残基经删除; (f)位置117之Arg残基经删除; (g)位置33之His残基之位置34之Pro残基之间经插入一 个Thr残基; (h)位置33之His残基及位置34之Pro残基之间经插入一 个Ala残基; (i)位置33之His残基及位置34之Pro残基之间经插入一 个Gly残基; (j)位置33之His残基及位置34之Pro残基之间经插入一 个Gly残基,且位置38之Pro残基经Ser残基所取代; (k)位置116之Gly残基及位置117之Arg残基之间经插入 一个Asn残基; (l)位置116之Gly残基及位置117之Arg残基之间经插入 一个Ala残基; (m)位置116之Gly残基及位置117之Arg残基之间经插入 一个Gly残基; (n)位置129之Leu残基经Arg残基所取代; (o)位置133之His残基经Arg残基所取代; (p)位置143之Met残基经Arg残基所取代; (q)位置82之Gly残基经Leu残基所取代; (r)位置146之Gly残基经Leu残基所取代; (s)位置148之Ser残基经Pro残基所取代; (t)位置59之Lys残基经Arg残基所取代;及 (u)位置115之Gly残基经Arg残基所取代, 其中SEQ ID NO:16之序列如下:2.根据申请专利范围第1 项之蛋白质,其于蛋白质之C-端具有Thr SerIleGly Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly Val His His His His His His 额外序列。3.根据申请专利范围第1或2项之蛋白质 ,其于蛋白质之–1及–2位置分别具有Met及Lys额外 胺基酸残基。4.根据申请专利范围第1或2项之蛋白 质,其于蛋白质之–1位置具有Met额外胺基酸残基 。5.根据申请专利范围第1或2项之蛋白质,其于蛋 白质之–1位置具有Gly额外胺基酸残基。6.一种用 于增加血小板之医药组合物,其含有根据申请专利 范围第1至5项中任一项之蛋白质。7.一种用于治疗 血小板障碍之医药组合物,其含有根据申请专利范 围第1至5项中任一项之蛋白质。8.一种用于治疗血 小板减少症之医药组合物,其含有根据申请专利范 围第1至5项中任一项之蛋白质。9.根据申请专利范 围第8项之医药组合物,其中该血小板减少症系由 化学治疗、放射线治疗或骨髓移植所引起。10.一 种DNA,其具有可编码根据申请专利范围第1至5项中 任一项之蛋白质之核酸序列。图式简单说明: 第一图表示于自XRP之大鼠TPO之精制,于凝胶过滤层 析法(Sephacryl S-200 HRF管柱)之层析图及于大鼠CFU-MK 测定之TPO活性之图。 第二图表示于来自XRP之大鼠低分子TPO对照标准品 之精制之于逆相层析法(Capcell Pak Cl 300A管柱)之层 析图及放大鼠CFU-MK测定之TPO活性之图。 第三图表示于来自XPR之大鼠低分子TPO对照标准品 之精制之逆相层析法(Capcell Pak Cl 300A管柱)之TPO活 性部分FA(管编号36~42)之藉由SDS-聚丙烯醯胺凝胶电 泳分离之相片,及于大鼠CFU-MK测定系之TPO活性之图 。 第四图表示于来自XRP之大鼠低分子TPO对照标准品 之精制之逆相层析法(Capcell Pak Cl 300A管柱)之TPO活 性部分FA之藉由3阶段消化之地图之图。 第五图表示于来自大鼠CFU-MK测定之来自大鼠血浆 之TPO活性之图。 第六图表示表现载体pEF18S之构组之概念图。 第七图表示于将大鼠CFU-MK测定之导入pEF18S-A2使 表现之COS1细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第八图表示于将大鼠CFU-MK测定之导入pEF18S-HL34,使 表现之COS1细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第九图表示于将大鼠CFU-MK测定之导入pHT1-231使表 现之COS1细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第十图a表示于将大鼠CFU-MK测定之导入pHTF1,使表现 之COS1细胞培养上清液之TPO活性之图。 第十图b表示于将M-07e测定之导入pHTF1使表现之COS1 细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第十一图噬菌体纯种系HGT1之限制地图之概略 。 (图中,E表EcoRI,H表Hind III S表Sal I) 第十二图a表示于大鼠CFU-MK测定之导入pEFHGTE使表 现之COS1细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第十二图b表示于M-07e测定导入pEFHGTE使表现之COS1 细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第十三图a表示于大鼠CFU-MK测定之导入pHT1-211#1及 pHT1-191#1及pHT1-171#2使表现之COS1细胞培养上清液中 之TPO活性之图。 第十三图b表示于大鼠CFU-MK测定之导入pHT1-163#2使 表现之COS1细胞培养上清液中之TPO活性之图。 第十四图表示于M-07e测定之导入pHT1-211 #1.pHT1-191 #1 .pHT1-171 #2及pHT1-163 #2使表现之COS1细胞培养上清液 中之TPO活性之图。 第十五图于自导入pDEF202-hTPO-P1使表现之CHO细胞之 培养上清液精制TPO之逆相层析法(Vydac C4管柱)之层 析图。 第十六图表示于自导入pDEF202-hTPO-P1使表现之CHO细 胞培养上清液精制之人类TPO之藉由SDS-聚丙烯醯胺 凝胶电泳分离之相片。 第十七图于自导入pCFM536/h6T(1-163)使表现之大肠菌 精制人类TPO之逆相层析法之层析图。 第十八图表示自导入pCFM536/h6T(1-163)使表现之大肠 菌分离精制之变异型人类TPO、h6T(1-163)之藉由SOS- 聚丙烯醯胺凝胶电泳分离之相片。 第十九图于将人类TPO表现载体pDEF202-hTPO163转染于 CHO细胞所得之培养上清液为起始材料之hTPO163精制 ,以Superdex 75 pg管柱之hTPO163之溶离。蛋白质以220nm 之紫外吸收测定。 第二十图于将人类TPO表现质体pDEF202-hTPO163转染于 CHO细胞所得之培养上清液为起始材料之hTPO163之精 制,以Superdex 75pg管柱所得之hTPO163对照标准品之SDS- 聚丙烯醯胺凝胶电泳相片,将各hTPO163作染银色。 第二十一图表示表现载体pSMT201之构造之图。 第二十二图表示于M-07e测定导入GL-TPO、N3/TPO、09 /TPO使表现之COS7细胞培养上清液中之TPO活性之图 。 第二十三图表示于M-07e测定导入人类TPO插入、缺 失衍生物使表现之COS7细胞培养上清液中之TPO活性 之图。 第二十四图表示将人类TPO静脉内投予正常小鼠内, 或皮下投予之情形之血小板数之推移。 第二十五图表示将投予正常小鼠之人类TPO之量改 变,皮下投予之情形之血小板数之推移之图。 第二十六图表示投予小鼠制癌齐(5-FU)后,投予人类 TPO之情形之血小板数之推移之图。 第二十七图投予小鼠制癌剂(ACNU)后,投予人类TPO之 情形之血小板数之推移之图。 第二十八图小鼠中施行BMT(骨髓移植)后,投予人类 TPO之情形之血小板数之推移之图。 第二十九图表示于放射线照射后之小鼠中投予人 类TPO之情形之血小板数之推移之图。 第三十图表示将hTPO163皮下投予正常小鼠之情形之 血小板数之推移之图。 第三十一图表示投予小鼠制癌(ACNU)后,投予hTPO163 之情形之血小板数之推移之图。 第三十二图表示于大肠菌表现之人类TPO衍生物(H 133R、S148P、Q115R)之M-07e测定之TPO活性之图。 第三十三图表示于大肠菌表现之人类TPO衍生物(N 143R、L129R、G82L、G146L、K59R)之M-07e测定之TPO活性之 图。 |
