| 主权项 |
1.一种纯化间白素-8之方法,其特色为 a)首先在缓冲溶液中溶解细胞 b)所得之溶胞液藉由重覆交叉流动超过滤法进行 分子量排除法处理,以此方式使得 i)在第一个过滤步骤中,间白素-8与其中伴随之较 大成份分离,与 ii)在第二个过滤步骤中,与较小成份分离, c)由方法步骤b)之缓冲化滤液利用阳离子交换色析 进行高解析纯化,其中利用间白素-8分子之带高正 电价表面形式,得以选择施用与溶离pH値,使之足以 高达恰使间白素-8能结合之程度,然后 d)令得自方法步骤c)之间白素-8溶出液之缓冲化溶 液经凝胶过滤法,透析法或超过滤法交换,及最后 e)由经方法步骤d)得到之间白素-8溶液进行冷冻乾 燥。2.根据申请专利范围第1项之方法,其特色为方 法步骤b)之第一个过滤步骤i)之交叉流动超过滤法 中,膜之截断范围低于间白素-8之分子量。3.根据 申请专利范围第2项之方法,其特色为该第一个过 滤步骤i)之交叉流动超过滤法于3kD截断。4.根据申 请专利范围第1项之方法,其特色为方法步骤b)之第 二个过滤步骤ii)之交叉流动超过滤法之膜截断范 围低于间白素-8之分子量。5.根据申请专利范围第 4项之方法,其特色为方法步骤b)之第二个过滤步骤 ii)之交叉流动超过滤法于0.1至1.5kD之截断范围内 进行。6.根据申请专利范围第5项之方法,其特色为 方法步骤b)之第二个过滤步骤ii)之交叉流动超过 滤法于1kD截断。7.根据申请专利范围第1至6项中任 一项之方法,其特色为方法步骤a)之细胞溶解作用 系采高压均质法进行。8.根据申请专利范围第1至6 项中任一项之方法,其特色为方法步骤a)之细胞溶 解作用系采用酵素或化学方法进行。9.根据申请 专利范围第1至6项中任一项之方法,其特色为方法 步骤a)之细胞溶解作用系采用2000至1500 psi压力与1 至6周期进行。10.根据申请专利范围第9项之方法, 其特色为方法步骤a)之细胞溶解作用系采用5000至 7000 psi压力与3至5周期进行。11.根据申请专利范围 第9项之方法,其特色为该细胞溶解作用系采用6000 psi压力与4周期进行。12.根据申请专利范围第1至6 项中任一项之方法,其特色为所溶解之细胞为原核 表现系统之细胞。13.根据申请专利范围第12项之 方法,其特色为所溶解之细胞为大肠杆菌(E.coli)细 胞。14.根据申请专利范围第1至6项中任一项之方 法,其特色为所溶解之细胞为真核表现系统之细胞 。15.根据申请专利范围第14项之方法,其特色为所 溶解之细胞为酵母菌细胞、昆虫细胞与哺乳类细 胞。16.根据申请专利范围第15项之方法,其特色为 酵母菌细胞系源于巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) 而昆虫细胞系源于杆状病毒转移感染之昆虫细胞 。17.根据申请专利范围第15项之方法,其特色为该 转形哺乳类细胞为CHO与BHK。18.根据申请专利范围 第14项之方法,其特色为亦方可使用转殖基因动物 之乳取代细胞。19.根据申请专利范围第18项之方 法,其特色为该转殖动物为牛或羊。20.根据申请专 利范围第1至6项中任一项之方法,其特色为方法步 骤c)所施用与溶离之pH値为pH8至pH 10。21.根据申请 专利范围第20项之方法,其特色为所施用与溶离之 pH値为pH 9.5。22.根据申请专利范围第1至6项中任一 项之方法,其特色为方法步骤b)第一个过滤步骤i) 之交叉流动超过滤法系采两相方式进行。23.根据 申请专利范围第22项之方法,其特色为交叉流动超 过滤法之第一相与第二相皆使用循环体积1至10升/ 分钟,过滤速率1至20毫升/分钟与穿膜压力1至150 psi 。24.根据申请专利范围第22项之方法,其特色为交 叉流动超过滤法之第一相所用之循环体积为1至4 升/分钟,过滤速率为5至8毫升/分钟与穿膜压力为1 至20 psi,而第二相所用之循环体积为3至6升/分钟, 过滤速率为10至15毫升/分钟与穿膜压力为20至50 psi 。25.根据申请专利范围第24项之方法,其特色为交 叉流动超过滤法之第一相所用之循环体积为2至3 升/分钟,过滤速率为6.3毫升/分钟与穿膜压力为10 psi,而第二相所用之循环体积为4至5升/分钟,过滤 速率为12.7毫升/分钟与穿膜压力为35 psi。26.根据 申请专利范围第23项之方法,其特色为交叉流动超 过滤法之第一相所用之循环体积为2至3升/分钟,过 滤速率为6.3毫升/分钟与穿膜压力为10 psi,而第二 相所用之循环体积为4至5升/分钟,过滤速率为18.7 毫升/分钟与穿膜压力为35 psi。27.根据申请专利范 围第1至6项中任一项之方法,其特色为方法步骤b) 之第二个过滤步骤ii)之交叉流动超过滤法所用之 循环体积为0.5至10升/分钟,过滤速率为1至20毫升/ 分钟与穿膜压力为5至150 psi。28.根据申请专利范 围第27项之方法,其特色为方法步骤b)之第二个过 滤步骤ii)之交叉流动超过滤法所用之循环体积为0 .5至3升/分钟,过滤速率为4至6毫升/分钟与穿膜压 力为8至12 psi。29.根据申请专利范围第27项之方法, 其特色为交叉流动超过滤法所用之循环体积为1至 2升/分钟,过滤速率为5毫升/分钟与穿膜压力为10 psi。30.根据申请专利范围第1至6项中任一项之方 法,其特色为方法步骤b)第一个过滤步骤i)所得之 细胞碎片 a)首先以尿素调成8M尿素溶液,然后 b)由该尿素溶液进行两倍高压均质法以溶解未溶 之间白素-8,与最后 c)根据方法步骤c)、d)与e)进一步纯化所得产物。31 .根据申请专利范围第30项之方法,其特色为a)与b) 提及之尿素溶液之最适pH为9.5。32.根据申请专利 范围第30项之方法,其特色为b)所进行之高压均质 法系采用2000至10000 psi压力与1至6周期进行。33.根 据申请专利范围第32项之方法,其特色为b)所进行 之高压均质法系采用4000至8000 psi压力与1至3周期 进行。34.根据申请专利范围第32或33项之方法,其 特色为b)所进行之高压均质化系采用6000psi压力与2 周期进行。35.根据申请专利范围第1至6项中任一 项之方法其系用于符合GMP下生产间白素-8。图式 简单说明: 第一图显示总蛋白质浓度系周期数之涵数。所示 之全部数学模型皆具对应之式子与参数。 第二图显示随时间由滤液III所得之间白素-8之总 量。 |
