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1.一种工业生产再组成高密度脂蛋白粒子(rHDL)之 制剂之方法,该再组成脂蛋白粒子系由脂蛋白元A-I (apoli-poproteln A-I)及卵磷脂所组成,且该制剂具202 克/升之蛋白质含量和温度20℃2℃下时具有低于40 NTU混浊度,该方法包含将含1~40克蛋白质/升浓度的 脂蛋白元A-I水溶液与卵磷脂-洗涤剂水溶液于未使 用有机溶剂下混合,该卵磷脂对洗涤剂的莫耳比例 在1:0.5至1.4的范围且脂蛋白元A-I对卵磷脂的重量 比在1:1.5至1:5.0的范围,将所获得的脂蛋白元A-I-卵 磷脂-洗涤剂混合物接着于使脂质在水中产生相变 化的温度10℃的温度范围内培养,洗涤剂用分子大 小排除法或用吸附剂吸附而移除,直到形成直径5~ 50奈米,质量在50000至1000000道耳吞的脂蛋白元A-I-卵 磷脂粒子,其中脂蛋白元A-I对卵磷脂之莫耳比是从 1:40至1:180,无须更进一步的纯化步骤即可回收来自 脂蛋白元A-I与卵磷脂之重组高密度脂蛋白粒子,其 中用掉超过95%的脂蛋白元A-I并且有超过90%的总卵 磷脂被结合。2.如申请专利范围第1项之方法,其中 洗涤剂的移除是利用超过滤的分子大小排除法来 进行,每克蛋白质最多使用2公升之缓冲液。3.如申 请专利范围第1项之方法,其中在脂蛋白元-洗涤剂 混合物经培养后,洗涤剂利用批式吸附(batch adsorptlon)或管柱方法,藉着吸附于疏水性吸附剂上 的方式来被结合。4.如申请专利范围第3项之方法, 其中疏水性吸附剂为不溶性的交联聚苯乙烯共聚 物。5.如申请专利范围第1项之方法,其中卵磷脂- 洗涤剂溶液还含有磷脂质、胆固醇、胆固醇脂、 脂防酸及/或三酸甘油酯。6.如申请专利范围第1项 之方法,其中所使用的脂蛋白元来源是富含脂蛋白 元A-I之人类血浆馏份,其至少经一次的病毒去活化 步骤的处理,该步骤系将此馏份于包含促溶成份( chaotropic components)的溶液中培养,而后更换缓冲液, 换成离子强度低于50毫莫耳/升的溶液,经过这些处 理后,有70%以上之脂蛋白元是处于单元体形式。7. 如申请专利范围第1项之方法,其中卵磷脂-洗涤剂 溶液内还含有磷脂质。8.如申请专利范围第8项之 方法,其中卵磷脂为合成卵磷脂。9.如申请专利范 围第1项之方法,其中卵磷脂为一种天然的卵磷脂, 较佳是萃取自大豆或蛋。10.如申请专利范围第9项 之方法,其中卵磷脂为大豆卵磷脂,且脂蛋白元A-I- 卵磷脂-洗涤剂混合物的培养系在0~15℃的温度下 进行。11.如申请专利范围第1项之方法,其中所采 用的洗涤剂是选自于胆酸类或其盐。12.如申请专 利范围第11项之方法,其中洗涤剂为胆酸钠盐或去 氧胆酸钠。13.如申请专利范围第1项之方法,其中 脂蛋白元A-I水溶液含有重组脂蛋白元,或来自人类 血浆富含脂蛋白元A-I之馏份之脂蛋白元。14.如申 请专利范围第1项之方法,其中卵磷脂-脂蛋白元A-I 洗涤剂混合物经培养后,洗涤剂的含量系经透析或 双过滤的方法,被减少到低于0.5克洗涤剂/克蛋白 质的浓度。15.如申请专利范围第1项之方法,其中 在洗涤剂分离前后,蛋白质的浓度可以藉双过滤法 被提高至10~50克/升。16.如申请专利范围第1项之方 法,其中脂蛋白元水溶液或卵磷脂-洗涤剂溶液系 缓冲于pH6至pH9的范围内。17.如申请专利范围第16 项之方法,其中脂蛋白元A-I水溶液或卵磷脂洗涤剂 溶液系缓冲于pH7.5至pH8.5的范围内。18.如申请专利 范围第1项之方法,其中所获得的产物在糖类安定 剂存在下,透过冷冻乾燥而被安定化。19.如申请专 利范围第18项之方法,其中产物之脂蛋白元A-I浓度 系被调整成5-50克/升,且使溶液安定化之冷冻乾燥 作用为在5~15%双醣如蔗糖,或2-10%单糖如甘露醇之 存在下进行。图式简单说明: 第一图系显示以不同比例之脂蛋白元A-I(apo A-I)/卵 磷脂时所制备的rHDL样品之分子大小排除层析之洗 脱曲线。 |
