| 主权项 |
1.一种制备DNA分子之方法,其包括: (a)得到一个指导合成多之区域,此为人类BSSL 胆盐刺激之脂(bile salt-stimulated lipase)或其生物 活性变型; (b)在该多编码区5'端上连接一个可指令该多 自巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)细胞分泌之讯号 之指导合成区域,此酵母细胞已以该DNA分子转形 ;及 (c)在(a)及(b)定义之该编码区域上操作连接巴斯德 毕赤酵母甲醇氧化启动子。2.根据申请专利范 围第1项之方法,其中该讯号具如下胺基酸序列: Met-Gly-Arg-Leu-Gln-Leu-Val-Val-Leu-Gly-Leu-Thr-Cys-Cys-Trp-A1a- Val-Ala-Ser-Ala。3.根据申请专利范围第1项之方法,其 中该讯号包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)转 化讯号。4.根据申请专利范围第1至3项中任一 项之方法,其中DNA分子编码人类BSSL之生物活性变 型,其中至少一个选自由Glu-Ala-Thr-Pro-Val-Pro-Pro-Thr- Gly-Asp-Ser,Glu-Ala-Thr-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Glu-Thr- Ala-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro- Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly- Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro- Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser, Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val- Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ala,Gly-Pro-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp- Ser,Gly-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Gly-Ala-Pro-Pro- Val-Thr-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Glu-Thr-Ala-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly- Asp-Ser,Gly-Ala-Pre-Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Gly-Asp-Ser,Glu-Ala-Ala- Pro-Val-Pro-Pro-Thr-Asp-Asp-Ser and Lys-Gly-Ala-Gln-Met-Pro-Ala- Val-Ile-Arg-Phe所组成之11个胺基酸重覆子单位被删 除。5.根据申请专利范围第1至3项中任一项之方法 ,其中DNA分子编码具有BSSL活性之多,及与下列序 列至少95%同质之胺基酸序列6.根据申请专利范围 第1至3项中任一项之方法,其中DNA分子编码具有如 下之胺基酸序列之多 或7.一种制备巴斯德毕赤酵母载体之方法,包括将 根据申请专利范围第1至3项中任一项所制得之DNA 分子并入载体。8.根据申请专利范围第7项之方法, 其中载体可中介人类BSSL或其生物活性变型于巴斯 德毕赤酵母细胞内之表现。9.根据申请专利范围 第8项之方法,其中载体系质体载体pARC 5771(CCRC 940116),其含有巴斯德毕赤酵母甲醇氧化启动子 及编码具天然讯号之BSSL蛋白质之cDNA、pARC 5799( CCRC 940117),其含有巴斯德毕赤酵母甲醇氧化启动 子及编码具天然讯号之BSSL蛋白质之cDNA或pARC 5797(CCRC 940118),其含有巴斯德毕赤酵母甲醇氧化 启动子及编码酿酒酵母转化讯号之基因及编 码BSSL变型BSSL-C之cDNA。10.一种制备寄主细胞方法, 包括将根据申请专利范围第7至9项中任一项所制 得之载体转形于毕赤酵母细胞。11.根据申请专利 范围第10项之方法,其中寄主细胞系GS115株之巴斯 德毕赤酵母细胞。12.根据申请专利范围第11项之 方法,其中寄主细胞系PPF-1[pARC 5771] (CCRC 940116)、GS 115[pARC 5799] (CCRC 90117)或GS115[pARC 5797] (CCRC 940118)。 13.一种产制人类BSSL或其生物活性变型之方法, 此方法包括在使该多可分泌至培养基中之条件 下培养根据申请专利范围第10至12项中任一项所制 得之宿主细胞,并自其中回收该多。 |
