鱼病多联抗独特型单克隆抗体疫苗制剂

摘要

鱼病多联抗独特型单克隆抗体疫苗制剂,涉及生物技术领域。本发明将鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华菌免疫小鼠,进行细胞融合,再克隆化,制备出特异性很强,且效价较高的单抗,进行纯化,再免疫小鼠,制备抗独特型单抗,挑选出保护率较高的抗独特型单抗以一定比例配制成鱼病多联抗独特型单抗疫苗制剂。对养殖鱼起很好的免疫保护作用,不污染环境,不会通过食物链对人类造成损害。

主权项

1．鱼病多联抗独特型单克隆抗体疫苗制剂，其特征是：将将鳗弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华菌进行扩增培养，再将培养后的菌液腹腔注射免疫小鼠Ba／b／c，取免疫后小鼠脾细胞和SP2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合，将细胞融合的细胞悬液进行培养，用酶联免疫反应法(ELISA法)检测阳性克隆，将确定为阳性的孔以有限稀释法，进行克隆化，再将阳性克隆的杂交瘤细胞株扩增培养，腹腔注射接种到Ba／b／c小鼠制备出腹水型单抗；将以上腹水型单抗以ELISA法进行效价，亚类及交叉试验，挑选效价较高的单克隆抗体，对海鱼进行保护试验，挑选对海鱼有较高保护率的单抗进行纯化，以每只小鼠10～100μg的量，腹腔注射免疫小鼠；然后进行细胞融合，筛选出能稳定分泌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，将细胞扩增培养，调整为1×106／ml，以每只小鼠0．5ml量，腹腔注射接种到Ba／b／c小鼠，制备腹水型抗独特型单克隆抗体，采用ELISA法，对以上单抗进行亚类、效价及β型抗独特型单克隆抗体鉴定；用以上单抗与不完全弗氏佐剂(1∶1～1∶2)混和，腹腔注射免疫海鱼，再挑选出对海鱼有较高保护率的抗独特型单抗以一定比例配制成鱼病多联抗独特型单抗疫苗制剂。