壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备

摘要

本发明是涉及壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备。以壳聚糖为原料制备壳聚糖微球,将壳聚糖微球加入木瓜蛋白酶溶液中,经吸附－交联得到壳聚糖微球固定化酶。本发明所得的产品具有性状均一、表面积大及酶活力回收率高等特点,对开发壳聚糖及及木瓜蛋白酶具有积极意义。

主权项

1．壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶的制备，其特征在于以壳聚糖为原料，用醋酸溶液将壳聚糖完全溶解得壳聚糖酸性溶胶，然后在搅拌条件下将壳聚糖酸性溶胶滴入分散介质透平油中，待溶胶均匀分散后，滴入不低于25％的戊二醛溶液，搅拌10～20分钟后，再用NaOH溶液将其pH调至9～10，于60～70℃水浴保温3～5小时，静置冷却后，弃去上层油层，在下层的固形物中先加入石油醚(I)与多余的透平油互溶，弃去上层，然后在下层固形物中加入丙酮与剩下的透平油互溶，弃去上层，然后用无水乙醇抽洗固形物至透平油完全洗净，真空干燥、过60～100目筛，用蒸馏水抽洗除去石油醚(I)、丙酮及无水乙醇，并真空干燥，即得到固定化酶的载体-壳聚糖微球，将壳聚糖微球在pH7.2的磷酸缓冲液中浸泡12～24小时，抽干，将抽干后的壳聚糖微球加入浓度为1～2.5mg/mL的木瓜蛋白酶溶液中，于4～40℃吸附4～24小时，加入0.3～1.5％的戊二醛溶液，使戊二醛溶液与总溶液的最终体积比为0.2～1.0∶100，于4～40℃交联，再用pH7.2的磷酸缓冲液洗去多余的戊二醛溶液并吸干，即制得壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶。