编码人α－干扰素的重组基因、表达载体的制备方法及该干扰素的纯化

摘要

本发明涉及一种编码人α－干扰素，并能有效的在酵母菌中表达的重组基因，其核苷酸序列在图１Ａ中列出；一种含所述基因的表达载体；用所述表达载体转染的酵母细胞；用所述的酵母转化体生产人α－干扰素的方法；高产纯化所述人α－干扰素的方法。$#!

主权项

1、制备具有如下核苷酸序列的用于在酵母中生产人α-干扰素的重组人α-干扰素基因的方法，包括如下步骤：用由酵母优选的密码子组成并使二级mRNA结构的形成最小化的序列替换用从人细胞分离的mRNA制备的人α-干扰素cDNA的5′-末端区80bp；并在编码第12-13、25-27、63-65和88-89位氨基酸的密码子中引入XbaⅠ、HindⅢ、BalⅡ和SacⅠ识别位点，在N-末端氨基酸的密码子之前引入起始密码子ATG，以及在成熟野生型人α-干扰素的C-末端氨基酸之后引入两个终止密码子TAA和TAG： 30ATG TGT GAT CTG CCT CAA ACT CAC AGC CTG 60GGT TCT AGA AGA ACC TTG ATG TTG CTA GCT 90CAA ATG AGA AAG ATA AGC TTG TTC TCC TGC 120TTG AAG GAC AGA CAT GAC TTT GGA TTT CCC 150CAG GAG GAG TTT GGC AAC CAG TTC CAA AAG 180GCT GAA ACC ATC CCT GTC CTC CAT GAG ATG 210ATC CAG CAG ATC TTC AAT CTC TTC AGC ACA 240AAG GAC TCA TCT GCT GCT TGG GAT GAG ACC 270CTC CTA GAC AAA TTC TAC ACT GAG CTC TAC 300CAG CAA CTG AAT GAC CTG GAA GCC TGT GTG 330ATA CAG GGG GTG GGG GTG ACA GAG ACT CCC 360CTG ATG AAG GAG GAC TCC ATT CTG GCT GTG 390AGG AAA TAC TTC CAA AGA ATC ACT CTC TAT 420CTG AAA GAG AAG AAA TAC AGC CCT TGT GCC 450TGG GAG GTT GTC AGA GCA GAA ATC ATG AGA 480TCC TTT TCT TTG TCA ACA AAC TTG CAA GAAAGT TTA AGA AGT AAG GAA TAA TAG