转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌的方法、产品及其应用

摘要

本发明涉及一种含人内皮抑素(Endostatin)基因的具有原核表达元件的质粒通过改进的基因转导方法转入到乳酸菌类菌株中得到一种转人Endostatin基因乳酸菌类,如转基因乳酸杆菌、转基因双歧杆菌和转基因乳酸链球菌,并按不同比例混合制备成转基因乳酸菌类口服制剂,用于治疗血管生成介导性、依赖性或相关性的疾病和治疗内皮细胞过量刺激或异常刺激引起的疾病,如实体肿瘤、血管纤维瘤、肿瘤转移、类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。

主权项

1、一种转人内皮抑素(Endostatin)基因乳酸菌的方法，其特征是：a：按常规方法，将专利申请号为97107112．8中的人Endostatin基因经酶切转移到具有原核表达元件的质粒载体中，对含这种转化载体的基因质粒菌株进行扩增，并从中提取纯化制得含人Endostatin基因的质粒载体；b：将作为受体的乳酸菌类菌株、如乳酸杆菌、双歧杆菌如乳酸链球菌培养到对数生长期，分别制得便于接受外源基因的乳酸菌类受体。采用适合于原核表达元件的改进的基因质粒转化方法——PEG法、氯化钙法及其它常规转化方法，用a所述的质粒载体对乳酸菌类菌株受体进行转化处理。经上述转化处理的乳酸菌类菌株经复苏培养后，涂布于含有青霉素的常规固体培养基平板上培养48-84小时，然后挑取单菌落培养于常规液体培养基中扩增培养，再扩增培养至继代培养不低于30代。