合成的人γ－干扰素基因（ｃＤＮＡ）在大肠杆菌中的高效表达

摘要

γ型干扰素（ＩＦＮ－γ）具有免疫调节、抗病毒和抗肿瘤等多种生物功能，是世界上竞相开发的基因工程产品。本发明是将设计的化学合成人γ型干扰素基因插入含有入噬菌体Ｐ_L启动基因的大肠杆菌载体，组建了γ型干扰素表达质粒。包含此种表达质粒的工程菌所产生的γ型干扰素可达到细菌可溶蛋白总量的６０—８０％。所产生的γ型干扰素浓集于包涵体中，分离包涵体，ＩＦＨ－γ纯度可达９０％。以后只经一步分子筛柱层析即可将ＩＦＨ－γ纯化到９６％以上纯度，比活数为２×１０⁷国际单位／ｍｇ蛋白。具有极高的生产价值。$#!

主权项

1、一种合成的人γ-型干扰素(IFN-γ)基因cDNA在大肠杆菌中高效表达的方法，其特征是：(a)使用人工设计，化学合成的基因，基因结构式如下：ATG CAG GAC CCG TAC GTT AAA GAA GCT GAA AAC CTG AAG AAA TAC TTC AAC GCT GGT CATMet Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly HisTCT GAC GTT GCT GAC AAT GGT ACC CTG TTC CTC GGG ATC CTG AAA AAC TGG AAA GAA GAASer Asp Val Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu GluTCT GAC CGT AAA ATC ATG CAA TCT CAG ATC GTT TCT TTC TAC TTC AAA CTG TTC AAA AACSer Asp Arg Lye Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe Lys AsnTTT AAA GAT GAT CAG TCT ATC CAG AAA TCT GTT GAA ACT ATC AAG GAA GAC ATG AAC GTTPhe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn ValAAA TTT TTC AAC TCT AAC AAG AAG AAA CGT GAC GAC TTC GAA AAG CTT ACT AAC TAC TCTLys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr SerGTT ACC GAT CTG AAC GTT CAA CGT AAA GCT ATC CAC GAG CTC ATC CAG GTT ATG GCT GAAVal Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala GluCTG TCT CCC GCG GCT AAA ACT GGT AAA CGT AAA AGA TCT CAG ATG CTG TTC CGC GGT CGTLeu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly ArgCGT GCT TCT CAG TAA TAGArg Ala Ser Gln TermTermIFN-γ由143个氨基酸组成，合成的该基因有429bp，加上起始密码子ATG，两个终止密码子TAA、TAG及克隆用的EcoRⅠ及SalⅠ限制性内切酶接头，共有447bp，选用了大肠杆菌使用频率高的密码子，使合成的IFN-γ基因能在大肠杆菌中高效表达，产生大量人IFN-γ，而不改变IFN-γ的氨基酸顺序；(b)将合成的IFN-γ基因克隆人带有PL启动子、CIts857温控阻遏蛋白基因、核糖体5SrRNA基因的终止信号t1t2和MCS区的表达载体pLY4后，构建成IFN-γ的表达质粒pLY4-γ，转化大肠杆菌后获得高效表达，IFN-γ占菌体可溶性总蛋白的60-80％，本发明的工程菌为大肠杆菌Escherichiacoli SIB-203-2 pLY4-γ，保藏登记号CCTCCM94022。