非同步链延伸聚合酶链反应

摘要

本发明是一种两条链非同步延伸的DNA体外扩增技术。首先根据待扩增的靶DNA序列合成一对特异性引物,再合成一条3’－末端经过修饰的失去延伸能力的一条靶DNA链的重复序列互补的寡重复序列。将该寡重复序列、链引物、耐热DNA聚合酶、dNTP底物、模板DNA、镁离子、PCR缓冲液、超纯水等混匀成反应体系,在热循环仪上进行高温、低温、中低温、中温和反复热循环,从而获得上百万拷贝的特异的靶DNA片段。本发明中的寡重复序列在热循环过程中的低温和中低温阶段时,与相应的互补模板链的重复序列退火,从而抑制模板之间的重复序列相互退火,使另一条模板链首先指导合成完整的互补新链;在热循环过程中的中温阶段时,则从模板链上脱离下来,并允许另一完整互补新链的合成。经过多次的热循环,产生大量的靶DNA片段。

主权项

1、一种将含有寡重复序列、引物、耐热DNA聚合酶、dNTP底物、模板DNA、镁离子、PCR缓冲液、超纯水等的反应体系进行高温、低温、中低温、中温反复热循环而达到目的DNA片段大量扩增的DNA体外扩增技术，其中的寡重复序列为依据靶DNA的重复序列合成的与其一条链的一小段重复序列互补的寡核苷酸，其3’-末端经过修饰失去了延伸能力；该寡重复序列在热循环过程中的低温和中低温阶段时，与相应的互补模板链的重复序列退火，从而抑制模板之间的重复序列相互退火，使另一条模板链首先指导合成完整的互补新链；在热循环过程中的中温阶段时，从与其结合的模板链上脱离下来，该模板随即指导合成完整互补新链；经过多次的热循环，产生大量的目的DNA片段。