人胰岛素前体基因在大肠杆菌中的直接表达及后加工方法

摘要

本发明是一种人胰岛素的基因工程生产方法。本法采用了大肠杆菌表达体系，实现了编码人胰岛素前体基因的直接表达，排除了传统采用的融合方式表达，给后加工带来了极大的方便。本法的表达率在２０—３０％，经细胞破碎分离包含体，包含体溶解，二硫键还原及重组，只经一根分子筛柱就可得纯度大于９０％的人胰岛素前体。此产物可直接用胰酶转肽转为人胰岛素，产品的化学结构、生物活性，与人胰岛素相同。

主权项

1.一种人胰岛素前体基因在大肠杆菌中的直接表达及后加工方法，其特征在于所述方法包括：(1)将编码人胰岛素前体的基因重组到表达质粒启动子的下游，转化大肠杆菌细胞，进行诱导表达；(2)表达产物以包含体形式生成，通过包含体的溶解、还原及重组，可通过分子筛柱一步得到纯度大于90％的前体分子；(3)前体分子可直接用胰酶在水一有机液中进行转肽，得到人胰岛素。