一种重组人血小板生成素及其制剂的生产方法

摘要

本发明公开了一种采用基因工程的方法，大量获得人血小板生成素（ｒｈＴＰＯ）及其制剂的生产工艺。在宿主细胞扩增培养阶段，细胞接种量为１．５×１０⁴/cm²—2.5×10⁴/cm²，小牛血清含量为８—１０％，细胞贴壁时间缩短至７２小时以下长成单层，单层细胞停留时间延长至２０—２４天，使ＣＨＯ细胞对ＴＰＯ的分泌表达量提高，从而大大提高了ＴＰＯ的得率。对培养所得物分离纯化ｒｈＴＰＯ是按“阴离子交换层析—疏水层析—分子筛凝胶层析”三步骤进行的。简化了分离纯化工艺，缩短了分离纯化时间，避免了目的蛋白在极性条件下的作用，增加了ＴＰＯ的稳定性。终产品的得率从常规方法的３０％左右提高到４５％左右。使用本方法生产的ＴＰＯ终产品，加入适量人血清白蛋白作保护剂，再加入１％甘露醇配制成注射液，可以用于治疗各种原因引起的血小板减少症。

主权项

1.一种应用基因工程技术生产重组人血小板生成素的方法，包括如下步骤：复苏含有重组人血小板生成素基因的中国仓鼠卵巢细胞；对复苏的细胞进行预培养：将预培养所得的细胞培养物以1.5×104/cm2-2.5×104/cm2的细胞接种量接种到小牛血清含量为8-10％的培养基中进行扩增培养；将扩增培养物用无血清培养基进行培养，其中细胞贴壁时间为20-24天；收获培养物上清液；对上清液进行阴离子交换层析，疏水层析和分子筛凝胶层析三个步骤来分离和纯化重组人血小板生成素。