有效的多重检测丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺损病毒(HIV)的寡核苷酸引物及其使用方法

摘要

本发明公开了用于同时检测人生物样本中的丙型肝炎病毒和人免疫缺损病毒的方法和试剂盒。

主权项

1.一种共检测生物样本中的丙型肝炎病毒(HCV)RNA和人免疫缺损病毒 (HIV)RNA的方法，该方法包括： (A)用来源于上述样本的RNA作为模板、并用至少一种引发从HCVRNA 的DNA逆转录的逆转录引物和至少一种引发从HIVRNA的DNA逆转录的逆 转录引物进行逆转录反应，以产生逆转录产物，该产物包括(a)HCV特异性逆转 录产物，(b)HIV特异性逆转录产物，或(c)包括(a)和(b)的组合； (B)用一对或多对对HCV的5‘非编码区特异的寡核苷酸引物和一对或多 对对HIV特异的寡核苷酸引物对上述逆转录产物进行扩增，以产生扩增产物， 该扩增产物包括(a)HCV特异性扩增产物，(b)HIV特异性扩增产物，或(c)(a) 和(b)的组合； 其中上述每一对对HCV特异的寡核苷酸引物包括： (i)正向引物5’-GGGAGAGCCATAGTGGTCTGCGGAA-3’(C131F25)<序 列号1>，和 (ii)反向引物5’-CGGGGCACTCGCAAGCACCCTATCA-3’(C294R25)<序 列号2>； 其中每一对对HIV-1特异的寡核苷酸引物包括如下序列的正向引物： 5’-CTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGA-3’(JBLTR4)<序列号3>，和 选自下列的对HIV-1特异的反向引物： (1)5’-GGGTCTGAGGGATCTCTAGTTACCAGAGT-3’(JBLTR6)<序列号4>， 和 (2)5’-TGTTCGGGCGCCACTGCTAGAGA-3’(JBLTR8)<序列号5>， 其中每一对对HIV-2特异的寡核苷酸引物包括：序列为 5’-GGGAGGTTCTCTCCAGCACTAGCA-3’(2LTR_e)<序列号6>的正向引物， 和对HIV-2特异、序列为5’-GCGACTAGGAGAGATGGGAACACACA- 3’(2LTR-R1)<序列号7>的反向引物；和 (C)检测上述扩增产物； 其中对HCV-特异性扩增产物的检出表明上述样本中存在HCVRNA，对 HTV-特异性扩增产物的检出表明上述样本中存在HIVRNA，对HCV-特异性扩 增产物和HIV-特异性扩增产物的检出表明上述样本中存在HCVRNA和HIV RNA。