| 主权项 |
1.一种经分离之核酸分子,其含有如下所示之SEQ.ID. NO.:1核酸序列:2.一种经分离之核酸分子,其含有 与申请专利范围第1项所示之SEQ.ID.NO.:1核酸序列 呈互补上序列。图式简单说明: 第一图构建pYBM31 第二图构建pYBM31TPlmc 第三图构建pYBMURA3B 第四图pYBMURA3Bsuc2 第五图构建pEcoEcoNco 第六图pUC19pBamDAAO 第七图构建pUC9BB2DAAO 第八图构建pYBM31pDAAOB 第九图构建pYBM31pDAAOBCAT 第十图构建pYBM31pDAAOEco 第十一图构建pYBM31pDAAOECAT 第十二图构建pYBM31pDAAOHind 第十三图构建pYBM31pDAAOHCAT 第十四图构建pYBMURA3B/bla 第十五图构建pYBMURA3B/hTGF- 第十六图将质体pYBM31pDAAOBCAT转染至DBY745。转型株 在添加2%葡萄糖、白胺酸、及腺嘌呤之SD培养液中 、30℃下通气生长过夜。用离心沉淀法收集细胞, 悬浮于水并在玻璃珠之存在下振荡细胞使之溶解 。用离心沉淀法移除细胞破片,用上清液测定CAT之 活性。 第十七图将质体pYBM31pDAAOECAT转染至DBY745。转型株 在添加2%葡萄糖、白胺酸、及腺嘌呤之SD培养液中 、30℃下通气生长过夜。用离心沉淀法收集细胞, 将细胞悬浮于水后与玻璃珠一起振荡溶解细胞。 用离心沉淀法移除细胞破片,取上清液测定CAT之活 性。 第十八图放大pYBMURA3B/b/a。为了直接用TPI启动子表 达-内醯胺,所以将-内醯胺基因选殖入pYBM 31TPlmc及pYBMura3B内单一的Ncol-BamHI位点。将重组的 质体转型至酿酒酵母菌品系DBY746。转型株用不含 尿嘧啶之基本培养皿筛选并用选择性之培养基进 行培养。 将从转型株分离之总DNA用HindIII水解,经0.7%琼脂糖 电泳后进行南方转移,并用32P标记的-内醯胺 DNA进行杂交。 第十九图放大pYBMURA3B/TGF-。为了直接用TPI启动 子表达TGF-,所以将人类TGF基因选殖入pYBM31TPlmc及 pYBMura3B内单一的Ncol-BamHI位点。将重组的质体转型 至酿酒酵母菌品系DBY746。转型株用不含尿嘧啶之 基本培养皿筛选并用选择性的培养基进行培养。 将从转型株分离之总DNA用HindIII水解,经0.7%琼脂糖 电泳后进行南方转移,并用32P标记的人类TGF-DNA 进行杂交。 |
