发明名称 木聚糖B之选殖及表现
摘要 在此提供选殖基因及其在所选的微生物宿主细胞中过度表现的方法及表现构筑体,基因系源自真菌且其编码具有一种麴菌(Aspergillus tubigensis)XYL B酵素活性的多。本发明提供高产量之XYL B,其可用于多种工业应用上。
申请公布号 TW387939 申请公布日期 2000.04.21
申请号 TW083100222 申请日期 1994.01.13
申请人 吉斯特/布劳凯斯公司 发明人 亚伯特.乔安思.约瑟夫.凡.奥耶;林德特.葛瑞夫;亨李特.布洛依克;约克.维瑟
分类号 C12N15/56;C12N15/80;D21C3/00;C12P19/14 主分类号 C12N15/56
代理机构 代理人 林志刚 台北巿南京东路二段一二五号七楼
主权项 1.一种纯化并分离之DNA序列;其编码具有Aspergillus tubigensis XYL B酵素活性之多,其特征为此DNA序列 是: a)如下所示真菌来源的DNA序列: ;或 b)包括木聚糖编码序列之DNA序列,其长度不包括 终止密码系介于660个及690个核酸之间,且在如下 严苛之杂交条件下,可与上述a)项序列杂交:于68℃ 之6XSSC中杂交18小时,再于30分钟内完成于68℃之5 XSSC/0.5%SDS中清洗两次,然后在30分钟内完成于68℃ 之2XSSC/0.5%SDS中清洗两次。2.一种制备含有如申请 专利范围第1项之DNA序列之表现构筑体的方法,包 括: a)单离如申请专利范围第1项之DNA序列,及 b)将能引导多过度表现之调节区连接至该DNA序 列上,该多在经此表现构筑体嵌入之丝状真菌中 具有木聚糖活性。3.如申请专利范围第2项之方 法,其进一步特征在于该调节区包括一种或一种以 上的下列特性:一个起动子,其系选自下列包括淀 粉葡萄糖(amyloglucosidase)基因衍生的起动子及对 木聚糖基因为天然的起动子;一个分泌领导序列 ,其系选自下列包括源自淀粉葡萄糖基因的分泌 领导序列及对木聚糖基因为天然的分泌领导序 列。4.一种获得能够高度表现多之微生物宿主 的方法,该多(木聚糖B)系由如申请专利范围第 1项之DNA序列编码,其特征在于该宿主细胞系以如 申请专利范围第2项之方法获得的表现构筑体予以 转形,且该微生物宿主是特别常用的表现宿主是黑 麴菌(Aspergillus niger),青森麴菌(Aspergilles awamori), Aspergillus aculeatus,米麴菌(Aspergillus oryzae),Aspergillus tubigensis,及 Trichoderma reesei。5.一种高度表现具有木聚糖B活 性之多的方法,该多是由申请专利范围第1项 之DNA序列编码,该方法之特征为下列步骤: a)培养如申请专利范围第4项之方法制得之微生物 宿主,在可引导编码有XYL B活性之多的基因表现 的条件下;且 b)回收自有XYL B活性的多。6.一种完全无氯( Totally Chlorine Free, TCF)之漂白方法,以XwQP表示,其特 征为下列步骤: 酵素分解(incubation, X),清洗(W),螯合(Chelating, Q)及过 氧化物漂白(P),其中用于步骤的酵素为如申请专利 范围第5项之方法制得之多。7.一种无氯元素( Elementary Chlorine Free,ECF)之漂白方法,以XD100ED表示, 其特征为酵素分解(X);二氧化氯(D)及硷萃取(E),其 中用于步骤X之酵素是如申请专利范围第5项之方 法制得之多。图式简单说明: 第一图:PIM170之部份限制图谱(restriction map)。粗 线代表次选殖于pEMBL18之HinDIII片段。xlnB基因之位 置及方向都有指出。 第二图:麴菌xlnB基因之核酸序列及其衍生的胺基 酸序列。N端胺基酸序列之决定乃因酵素是由第一 行之核酸序列124位子至180位子开始的。在本序列 中有一段推断的插入子(intron),位于290至357位子,以 ( )表示。
地址 荷兰