| 主权项 |
1.一种自生物培养基纯化rDSPA1的方法,此方法包 括: (a)在承载条件下将培养基加至阳离子交换树脂上, 结果使rDSPA1选择性地结合于阳离子交换树脂上; (b)视需要,洗涤此阳离子交换树脂,除去非rDSPA1 蛋白质及蛋白质污染物; (c)自阳离子交换树脂上选择性地溶析结合的rDSPA 1; (d)将步骤(c)所得含rDSPA1的洗出液在承载条件下 加至疏水性交互作用树脂上,使rDSPA1选择性地结 合于疏水性交互作用树脂上; (e)视需要,洗涤此疏水性交互作用树脂,除去非rDSPA 1蛋白质及非蛋白质污染物; (f)自疏水性交互作用树脂上选择性地溶析结合的 rDSPA1; (g)将步骤(f)所得含rDSPA1的洗出液在承载条件下 加至亲合性层析树脂上,使rDSPA1选择性地结合于 亲合性层析树脂上; (h)视需要,洗涤此亲合性层析树脂,除去非rDSPA1 蛋白质及非蛋白质污染物; (i)自亲合性层析树脂上选择性地溶析结合的rDSPA 1,制成实质上纯的rDSPA1水溶液。2.根据申请专 利范围第1项之方法,其中生物培养基是制约培养 基。3.根据申请专利范围第1项之方法,其中步骤(a) 所用阳离子交换树脂系由矽胶颗粒,交联琼脂糖, 或交联聚甲基丙烯酸酯聚合物,经羧基或羧基烷基 衍化所构成。4.根据申请专利范围第3项之方法,其 中阳离子交换树脂系由其价结合于聚伸乙基亚胺 矽烷的二氧化矽颗粒基质所构成,其中聚伸乙基亚 胺矽烷的胺基系经羧基衍化。5.根据申请专利范 围第3项之方法,其中步骤(a)之承载条件包括添加pH 4及7之培养基。6.根据申请专利范围第4项之方法, 其中步骤(c)中rDSPA1之溶析系使用含50mM磷酸钠及 100mM至500mM NaCl的缓冲液,或等离子强度的缓冲液进 行。7.根据申请专利范围第1项之方法,其中步骤(d) 之疏水性交互作用树脂是不带电的树脂,经1-10个 碳长度的烷基链或芳基烷基衍化。8.根据申请专 利范围第7项之方法,其中不带电的树脂系由矽胶 颗粒,交联琼脂糖,或交联聚甲基丙烯酸酯聚合物 构成。9.根据申请专利范围第7项之方法,其中不带 电的树脂系由乙二醇及经丁基衍化之甲基丙烯酸 酯型聚合物共聚合合成的半刚体球形珠构成。10. 根据申请专利范围第9项之方法,其中步骤(d)的承 载条件包括添加来自步骤(c)之pH3至5之洗出液。11. 根据申请专利范围第9项之方法,其中步骤(d)的承 载条件包括添加含在50mM磷酸钠,500mM NaCl,以磷酸调 整至pH4,或含在等离子强度的缓冲液内之步骤(c)之 洗出液。12.根据申请专利范围第9项之方法,其中 步骤(d)的溶析系使用含20mM HCl及乙醇浓度大于25% 的缓冲液进行。13.根据申请专利范围第12项之方 法,其中乙醇浓度为28.5%至30%之间。14.根据申请专 利范围第12项之方法,其中乙醇浓度为29%。15.根据 申请专利范围第1项之方法,其中步骤(g)之亲合性 层析树脂系由烯丙基葡聚糖及N,N'-亚甲基双丙烯 基醯胺之交联共聚物构成,为直径25至75微米的珠 形。16.根据申请专利范围第15项之方法,其中珠子 能分离20,000至8,000,000千道尔顿的球形蛋白质。17. 根据申请专利范围第15项之方法,其中步骤(g)之承 载条件包括添加来自步骤(f)之pH1至4的洗出液。18. 根据申请专利范围第15项之方法,其中步骤(i)之溶 析是使用含200mM甘胺酸的pH3至6的缓冲液,或等离子 强度的缓冲液进行。19.根据申请专利范围第1项之 方法,其还包括浓缩rDSPA1之水溶液。20.根据申请 专利范围第19项之方法,其还包括冷冻乾燥该浓缩 的rDSPA1溶液。21.根据申请专利范围第1项之方法 ,其还包括浓缩rDSPA1之水溶液及冷冻乾燥该浓缩 的rDSPA1溶液。22.根据申请专利范围第1项之方法 ,其中此方法包括如下步骤: (a)将pH4至7的培养基加至阳离子交换树脂上,而此 阳离子交换树脂系由矽胶颗粒,交联琼脂糖,或聚 甲基丙烯酸酯交联聚合物经羧基或羧基烷基衍化 构成,结果使rDSPA1选择性地结合于阳离子交换树 脂上; (b)视需要,洗涤此阳离子交换树脂,除去非rDSPA1 蛋白质及非蛋白质污染物; (c)用含50mM磷酸钠及100mM至500mM氯化钠的缓冲液,或 等离子强度缓冲液,自阳离子交换树脂上选择性地 溶析结合的rDSPA1; (d)将步骤(c)所得含rDSPA1的pH3至5洗出液加至由矽 胶颗粒,交联琼脂糖,或交联聚甲基丙烯酸酯聚合 物构成的疏水性交互作用树脂上,使rDSPA1选择性 地结合于疏水性交互作用树脂上; (e)洗涤此疏水性交互作用树脂,除去非rDSPA1蛋白 质及非蛋白质污染物; (f)用含20mM HCl且乙醇浓度大于25%的缓冲液自疏水 性交互作用树脂上选择性地溶析结合的rDSPA1; (g)将步骤(f)所得含rDSPA1的pH1至4的洗出液加至直 径25至75微米的由烯丙基葡聚糖及N,N'-亚甲基双丙 烯醯胺的交联聚合物构成的珠形亲合性层析树脂 上,使rDSPA1选择性地结合于亲合性层析树脂上; (h)视需要,洗涤此亲合性层析树脂,除去非rDSPA1 蛋白质及非蛋白质污染物; (i)用合200mM甘胺酸的pH3至6的缓冲液,或等离子强度 的缓冲液自亲合性层析树脂上选择性地溶析结合 的rDSPA1,制成实质上纯的rDSPA1水溶液。23.一种 自生物培养基中分离及纯化rDSPA1的方法,此方法 包括: (a)将pH5的培养基加至阳离子交换树脂上,此阳离子 交换树脂由共价键合于聚伸乙基亚胺矽烷的二氧 化矽颗粒基质构成,其中胺基已由羧基衍化,结果 使rDSTA1选择性地结合于阳离子交换树脂上; (b)用pH7.5的100mM NaOAc及50mM NaPO4洗涤pH5的阳离子交 换树脂,除去非rDSPA1蛋白质及非蛋白质污染物; (c)用含50mM磷酸钠及500mM氯化钠的pH7.5的缓冲液,自 阳离子交换树脂上选择性地溶析结合的rDSPA1; (d)将步骤(c)所得含rDSPA1的pH4的洗出液加至疏水 性交互作用树脂上,此疏水性交互作用树脂由乙二 醇及经丁基衍化的甲基丙烯酸酯型聚合物共聚合 合成的半刚体球形珠构成,结果使rDSPA1选择性地 结合于疏水性交互作用树脂上; (e)用20mM HCl然后用含19%EtOH的20mM HCl洗涤此疏水性 交互作用树脂,除去非rDSPA1蛋白质及非蛋白质污 染物; (f)用含29%乙醇及20mM盐酸于pH2.5的缓冲液自疏水性 交互作用树脂上溶析结合的rDSPA1; (g)将步骤(f)所得含rDSPA1的pH2.5的洗出液加至由 烯丙基葡聚糖及N,N'-亚甲基双丙烯醯胺的交联聚 合物构成的亲合性层析树脂上,此交联聚合物分离 20,000至8,000,000千道尔顿的球形蛋白质,使rDSPA1选 择性地结合于亲合性层析树脂上; (h)用20mM HCl洗此亲合性层析树脂,除去非rDSPA1蛋 白质及非蛋白质污染物; (i)用200mM甘胺酸的pH4至5的缓冲液自亲合性层析树 脂上溶析结合的rDSPA1,制成实质上纯的rDSPA1水 溶液。 |
