| 主权项 |
1.一种如下所示之核酸序列,其具有编码猪假性狂 犬病毒中国台湾CF强毒株之gE醣蛋白质(glycoprotein gE)之 核酸序列 及其简并序列。2.一种具有猪假性狂犬病毒gE醣蛋 白质活性之蛋白质,其具如下序列3.一种具有猪假 性狂犬病毒gE醣蛋白质活性之多胜,其具如申请 专利范围第2项所示序列第77至210位之胺基酸序列 。4.一种利用遗传基因工程技术制备具有猪假性 狂犬病毒gE醣蛋白质活性之蛋白质之方法,包括: (a)制备根据申请专利范围第1项之猪假性狂犬病毒 中国台湾CF强毒株之gE基因, (b)将该基因嵌入含有T5转录启动子之表现载体上, (c)将该载体送入大肠杆菌宿主细胞中,且 (d)于适合该宿主细胞表现该基因之条件下培养该 宿主细胞,并分离及纯化所表现之蛋白质。5.根据 申请专利范围第4项之方法,其系用以制备根据申 请专利范围第2项之蛋白质。6.根据申请专利范围 第5项之方法,其系用以制备根据申请专利范围第3 项之蛋白质。7.根据申请专利范围第4.5或6项之方 法,其中该猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质基因片段系 嵌入T5转录启动子之下游。8.根据申请专利范围第 4.5或6项之方法,其系将含有T5转录启动子及猪假性 狂犬病毒gE醣蛋白质基因片段之质体殖入含有pREP4 质体之大肠杆菌中。9.根据申请专利范围第4.5或6 项之方法,其包括: (a)将猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质基因片段嵌入含 有T5转录启动子之表现载体上, (b)将该含有T5转录启动子及猪假性狂犬病毒gE醣蛋 白质基因片段的质体殖入含有pREP4质体之宿主中, (c)在适当温度下培养该宿主至快速繁殖期,然后加 入化学诱导剂,解除LacI抑制基因之作用,于是大量 转录T5启动子下游之猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质片 段基因,使得gE蛋白质被大量制造, (d)再经培养;以及 (e)大量制造猪假性狂犬病毒之gE蛋白质10.一种利 用免疫方法侦测抗猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质抗 原特异性抗体之方法,其系使一种根据申请专利范 围第1项之核酸序列所编码之蛋白质抗原,或根据 申请专利范围第2或3项之蛋白质与检品接触,然后 侦测是否有抗原-抗体结合物存在。11.根据申请专 利范围第10项之方法,其包括: (a)提供一种由根据申请专利范围第1项之核酸序列 所编码之蛋白质抗原,或根据申请专利范围第2或3 项之蛋白质, (b)提供一支持固相, (c)将由根据申请专利范围第1项之核酸序列所编码 之蛋白质抗原,或根据申请专利范围第2或3项之蛋 白质附于该支持固相上, (d)使附于该支持固相上之由根据申请专利范围第1 项之核酸序列所编码之蛋白质抗原,或根据申请专 利范围第2或3项之蛋白质于该支持固相上与检品 接触,与检品中之特异性抗体反应,形成结合物;且 (e)提供一种经讯号产生工具标帜之抗猪抗体,其中 该产生讯号之抗猪抗体与该结合物结合,藉所产生 之讯号检测该专一性抗体之量。12.根据申请专利 范围第11项之方法,其中步骤(e)系提供一种经讯号 产生工具标帜之抗猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质单 株抗体,以与检品竞争附于支持固相上之抗原,藉 讯号产生之有无,判定检品中抗猪假性狂犬病毒gE 醣蛋白质抗原特异性抗体之存在与否。13.根据申 请专利范围第10项之方法,其包括: (a)提供一支持固相, (b)将检品附于该支持固相上, (c)提供一种由根据申请专利范围第1项之核酸序列 所编码之蛋白质抗原,或根据申请专利范围第2或3 项之蛋白质, (d)使附于该支持固相上之检品与该由根据申请专 利范围第1项之核酸序列所编码之蛋白质抗原,或 根据申请专利范围第2或3项之蛋白质于该支持固 相上接触,反应形成结合物;且 (e)提供一种经讯号产生工具标帜之抗猪抗体,其中 该产生讯号之抗猪抗体与该结合物结合,藉所产生 之讯号检测该专一性抗体之量。14.根据申请专利 范围第11.12或13项之方法,其使用根据申请专利范 围第3项之蛋白质。15.根据申请专利范围第11.12或 13项之方法,其中该讯号产生工具系选自过氧化, -半乳醣,及硷性磷酸所标帜者,或萤光标 帜及其他可检验之标帜。16.根据申请专利范围第 15项之方法,其中该讯号产生工具系硷性磷酸所 标帜者。17.根据申请专利范围第15项之方法,其中 该讯号产生工具系过氧化所标帜者。18.根据申 请专利范围第15项之方法,其中该讯号产生工具系 -半乳糖所标帜者。19.根据申请专利范围第 15项之方法,其中该讯号产生工具系萤光标帜者。 20.一种用以检验猪假性狂犬病及经gE基因缺损疫 苗免疫之猪只之检验试剂,其特征系含有至少一种 由根据申请专利范围第1项之核酸序列所编码之蛋 白质,或根据申请专利范围第2或3项之蛋白质。21. 根据申请专利范围第27项之检验试剂,其特征系包 含根据申请专利范围第3项之蛋白质。22.一种侦测 抗猪假性狂犬病毒gE醣蛋白质抗原特异性抗体之 套组,其特征系含有一种根据申请专利范围第1项 之核酸序列所编码之蛋白质抗原,或根据申请专利 范围第2或3项之蛋白质。23.根据申请专利范围第22 项之套组,其含有: (a)一个支持固相, (b)一种附于支持固相上用以吸附检品中特异性抗 体之蛋白质,其系至少一种由根据申请专利范围第 1项之核酸序列所编码之蛋白质,或根据申请专利 范围第2或3项之蛋白质,及 (c)一种讯号产生工具,其包括操作性结合有抗猪抗 体及产生可识别讯号之酵素或萤光,因此当该由申 请专利范围第1项之核酸序列所编码之蛋白质,或 根据申请专利范围第2或3项之蛋白质吸附该特异 性抗体而与该讯号产生工具之抗猪抗体结合时,可 产生抗原-特异性抗体-抗猪抗体萤光物质结合物, 而由讯号产生工具所产生之讯号侦测特异性抗体 之量。24.根据申请专利范围第22项之套组,其含有: (a)一个支持固相, (b)一种蛋白质,其系至少一种由根据申请专利范围 第1项之核酸序列所编码之蛋白质,或根据申请专 利范围第2或3项之蛋白质,及 (c)一种讯号产生工具,其包括操作性结合有抗猪抗 体及产生可识别讯号之酵素或萤光,因此当该由申 请专利范围第1项之核酸序列所编码之蛋白质,或 根据申请专利范围第2或3项之蛋白质,分别与附于 支持固相上之检品中之特异性抗体及该讯号产生 工具之抗猪抗体结合时,可产生特异性抗体-抗原- 抗猪抗体萤光物质结合物,而由讯号产生工具所产 生之讯号侦测特异性抗体之量。25.根据申请专利 范围第23或24项之套组,其特征系使用根据申请专 利范围第3项之蛋白质。26.根据申请专利范围第23 或24项之套组,其中该讯号产生工具系选自过氧化 ,-半乳糖,及硷性磷酸或萤光标帜及其 他可检验之标帜。27.根据申请专利范围第26项之 套组,其中该讯号产生工具系过氧化所标帜者。 28.根据申请专利范围第26项之套组,其中该讯号产 生工具系-半乳糖所标帜者。29.根据申请专 利范围第26项之套组,其中该讯号产生系统之酵素 系硷性磷酸。30.根据申请专利范围第26项之套 组,其中该讯号产生工具系萤光标帜者。31.一种侦 测猪假性狂犬病病毒gE醣蛋白质之探针,其具如申 请专利范围第1项所示核酸序列及其简并序列之第 227至246硷基或第1,711至1,731硷基。32.一种载体pDB 234,其于食品工业发展研究所之寄存编号为940017。 33.一种大肠杆菌宿主细胞,其含有根据申请专利范 围第32项之载体。图式简单说明: 第一图具有PR病毒gE醣蛋白质基因之核酸序列。 第二图具有PR病毒gE醣蛋白质之胺基酸序列。 第三图具有PR病毒gE醣蛋白质基因之限制图谱。 第四图选殖PR病毒gE醣蛋白质基因之过程简图。 第五图含载体pDB 234之菌体蛋白质之十二丙烯酸纳 之聚乙醯胶体(SDS-PAGE)电泳胶图。 第六图含载体pDB 234之菌体蛋白质,与经PR病毒感染 之猪血清,经PR病毒gE基因缺损疫苗免疫之猪只血 清,和无特异性病原之猪血清IgG进行西式墨渍法分 析之结果。 第七图含载体pDB 234之菌体蛋白质,与经PR病毒感染 之猪血清,和无特异性病原之猪只血清IgG进行西式 墨渍法分析之结果。 |
