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<p>L'invention concerne une méthode d'amplification d'une première et d'une seconde séquences nucléotidiques complémentaires, chacune d'entre elles présentant une région de liaison au niveau de son extrémité 3'. Ladite méthode consiste à traiter les séquences monocaténaires séparées avec: (a) une première et une deuxième amorces susceptibles d'hybrider les régions de liaison 3' des premier et second brins respectivement, chacune comportant une région résistant à la digestion éloignée de son extrémité 5', région qui, avec l'amorce hybridée à la région de liaison 3', ne permet qu'une digestion partielle de l'amorce par l'enzyme (d) ayant une activité exonucléase spécifique des doubles brins 5'; (b) une troisième et une quatrième amorces présentant chacune un degré d'homologie de séquences avec les régions partiellement digestibles de la première et de la seconde amorces, la troisième et la quatrième amorces étant capables d'hybrider les régions de liaison 3' des premier et du second brins respectivement; (c) une enzyme présentant une activité polymérase déplaçant les brins; (d) une enzyme présentant une activité exonucléase spécifique des doubles brins 5', ladite enzyme (d) étant éventuellement fournie par l'enzyme (c) dans le cas où cette dernière présente également l'activité exonucléase requise; et (e) des triphosphates nucléosidiques. La réaction est conduite dans des conditions permettant l'hybridation, la digestion de l'exonucléase et la polymérisation par déplacement des brins, ce qui permet d'obtenir des premier et second brins en quantités plus importantes.</p> |
