生物抗菌肽及其制备方法

摘要

本发明涉及一种生物抗菌肽及其制备方法,本发明的抗菌肽以林蛙蛙皮为原料,经除脂除肌肉前处理、溶胀、匀浆、抽提、离心、沉淀、透析除盐、浓缩、洗脱、收集活力峰等步骤,最后制得。本抗菌肽具有制备工艺简单、产率高、抗菌谱广、杀菌效力高等优点,可广泛地应用于食品、水果及蔬菜保鲜及护肤品等领域。

主权项

1、一种用林蛙蛙皮制备生物抗菌肽的方法，其步骤如下：(1)取林蛙干皮或鲜皮，进行除脂，除肌肉的前处理； (2)加少量的缓冲液，于4℃～80℃溶胀1～24小时；(3)鲜皮或溶胀后干皮于组织匀浆器中匀浆；(4)加缓冲液，10～100ml/g蛙皮，于4℃～80℃抽提2～72小时；(5)3000～10000r.p.m,5～30min离心，收集上清，沉淀。可重复操作4,5步骤2～3次；(6)上清液加(NH4)2SO4沉淀，(NH4)2SO4终浓度为20～80％；或沸水浴5～10min；(7)4000～20000r.p.m,10～30min离心，收集上清液；(8)合并上清透析24～72小时除盐；(9)透析后上清液超滤浓缩，超滤膜分子量截留值为1000Da，或冻干浓缩；(10)浓缩液上CM-纤维柱，平衡液为pH4.0～5.0,0.01～0.1mol/LNaAc-HAc缓冲液，洗脱液为pH5.0～5.5,0.1～0.5mol/LNaAc-HAc缓冲液梯度洗脱，收集活力峰；(11)活力峰超滤浓缩，超滤膜分子量截留值为1000Da，或冻干浓缩；(12)浓缩液上Sephadex G-25/G-50柱，洗脱条件为pH6.0～7.0,0.01～0.1mol/L磷酸缓冲液，收集活力峰；(13)活力峰超滤浓缩，超滤膜分子量截留值为1000Da，或冻干浓缩；(14)浓缩液上制备型HPLC,10～80％乙腈(0.01％TFA)洗脱，或梯度洗脱，收集活力峰；(15)活力峰冻干，于零下20℃保存，得从林蛙蛙皮制备的抗菌肽。