获得2－氨基－4－甲膦酰丁酸基因的方法

摘要

通过在绿色产色链霉菌ＤＳＭ４１１２中选择２－氨基－４－甲膦酰－丙氨酰－丙氨酸（ＰＴＴ）抗性而产生ＰＴＴ抗性的选择体。用ＢａｍＨＩ酶切这些选择体的总ＤＮＡ得到携有Phosphinothricin(PTC)抗性基因的DNA片段,克隆4.0Ｋb大小的片段并选择ＰＴＴ抗性。此基因适用于生产ＰＴＣ抗性的植物，以及作为抗性标记用于Ｌ型外消旋ＰＴＣ的选择性Ｎ－乙酰化作用。

主权项

1.一种获得2-氨基-4-甲膦酰丁酸(PTC)抗性基因的方法，该基因编码以下所示的氨基酸序列，ValSerProGluArgArgProValGluIleArgProAlaThrAlaAlaAspMetAlaAlaValCysAspIleValAsnHisTyrIleGluThrSerThrValAsnPheArgThrGluProGlnThrProGlnGluTrpIleAspAspLeuGluArgLeuGlnAspArgTyrProTrpLeuValAlaGluValGluGlyValValAlaGlyIleAlaTyrAlaGlyProTrpLysAlaArgAsnAlaTyrAspTrpThrValGluSerThrValTyrValSerHisArgHisGlnArgLeuGlyLeuGlySerThrLeuTyrThrHisLeuLeuLysSerMetGluAlaGlnGlyPheLysSerValValAlaValIleGlyLeuProAsnAspProSerValArgLeuHisGluAlaLeuGlyTyrThrAlaArgGlyThrLeuArgAlaAlaGlyTyrLysHisGlyGlyTrpHisAspValGlyPheTrpGlnArgAspPheGluLeuProAlaProProArgProValArgProValThrGlnIle该方法包括选择抗2-氨基-4-甲膦酰-丙氨酰-丙氨酸(PTT)的绿色产色链霉菌DSM4112，从抗性菌株中分离总DNA，用BamHI切割此DNA，分离大小为4.0Kb的片段，该片段携带PTC抗性基因，以含有该抗性基因的完整或亚片段形式克隆此片段，并选择PTT抗性，从而得到携带PTC抗性基因的选择体。