异源基因在细菌细胞中的染色体表达

摘要

本发明提供了用于通过将编码兴趣异源蛋白的基因的一个拷贝插入到宿主细胞(如大肠杆菌)的染色体中来产生兴趣异源蛋白的组合体和方法。使用染色体转化DNA(环形的非自我复制的DNA)将编码兴趣异源蛋白的基因整合到宿主细胞染色体。所说的染色体转化DNA包含至少一个选择标记,还可以包含或不包含侧翼于选择标记的重复DNA序列,其有利于整合的DNA的染色体扩增。所说的编码兴趣蛋白质的基因可以在整合到宿主细胞的染色体之后表达;可以在所说的基因表达之前进行染色体扩增的选择。

主权项

1.一种产生异源兴趣蛋白质的方法，该方法包括下列步骤：将染色体转化DNA转移到细菌宿主细胞中，其中所说的染色体转化DNA包含至少编码异源兴趣蛋白质基因的一个拷贝和选择标记，其中所说的宿主细胞包含染色体；对所说的染色体转化DNA整合到所说的宿主染色体进行选择，形成的宿主细胞染色体包含编码异源兴趣蛋白质的基因和侧翼于重复DNA的选择标记，所说的基因可操作地连接到在宿主细胞中有功能的启动子上；和表达所说的基因，在多拷贝质粒载体中构建转化DNA的过程中，其中所说的基因决不可操作地连接到在宿主细胞有功能的启动子上，其中所说的非细菌兴趣蛋白质在所说的宿主细胞中积累水平超过总细胞蛋白的0.1％。