产生大量存活的棉花植物的体外组织培养方法

摘要

本发明涉及从特定棉花植物的组织产生大量可存活棉花植物的体外组织培养方法。发明提供了不依赖基因型、直接的、复枝繁殖的方法,并提供了微繁殖、突变体的选择以及用农业生物技术和基因工程的现代方法产生基因改良的棉花植物开创了新的可能性。本发明的方案提供了用组织培养技术使棉花成功改良的重要步骤。

主权项

1.一种通过组织培养技术从带有或不带有一片或部分子叶的棉花秧苗的子叶结(也称为子叶轴或腋)开始再生大量存活的和可育的棉花植物，所述的方法包括：(i)用常规的方法处理棉花植物的种子以除去细菌/真菌(污染物)，(ii)在pH5.4-6.2范围里，在由下列物质构成的第一培养基中培养步骤(i)所得的处理过的种子进行发芽：a.任何常规培养基的盐，b.任何常规培养基的维生素，c.碳来源，和d.凝胶剂培养基通过压热器消毒，培养在光存在下(至少40微摩尔/米2秒)于20-40℃温度下进行16小时，持续3天到数周，(iii)切下从步骤(ii)所得的带有或不带有部分或完整子叶的子叶结(外植体)，(iv)在pH5.4-6.2的范围里，在由下列物质构成的第二培养基中培养从步骤(iii)所得的外植体，以达到枝条繁殖：a.任何常规培养基的盐，b.任何常规培养基的维生素， c.碳源，d.植物激素(植物生长调节剂)，浓度范围为0.1-100μM的诸如6-苄基氨基嘌呤、6-苄基腺嘌呤、γ，γ-二甲基烯丙基氨基嘌呤、激动素和细胞激动素活性脲衍生物的细胞激动素结合物，e.凝胶剂培养基通过压热器消毒，培养在光存在下(至少40微摩尔/米2秒)于20-40℃温度下进行16小时；(v)继续培养，最少达4周直至形成许多枝条；(vi)收获形成的枝条；(vii)在pH5.4-6.2范围里，将收获的枝条转移到包括下列物质的生根培养基(第三培养基)中：a.任何常规培养基的盐，b.任何常规培养基的维生素，c.碳源，d.植物激素(植物生长调节剂)，包括选自吲哚乙酸、吲哚丁酸和萘乙酸的植物生长素，e.凝胶剂 培养基通过压热器消毒，(viii)在温度20-40℃和光存在下(至少40微摩尔/米2秒)培养16小时，直至形成根。