两性蛋白质转染药物试剂的制备方法

摘要

广谱性两性蛋白质转染药物试剂和靶向性两性蛋白质转染药物试剂的特征是，广谱性转染试剂能将各种药物如荧光抗体、DNA及小分子染料等药物制成载药转染试剂，它能对具有代表性的不同类型细胞如小鼠骨髓瘤细胞、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞及萌发状态的植物花粉细胞进行转染。靶向性转染试剂它可以用各种类型抗体进行分子修饰，使两性蛋白质转染试剂成为载药并具有与靶细胞之间显示的亲和力。

主权项

1、一种两性蛋白质转染药物试剂的制备方法，其特征在于所述方法包括：广谱性载药两性蛋白质转染试剂的制备方法和靶向性载药两性蛋白质转染试剂的制备方法，①两性蛋白质醇溶液的制备：取纯系小麦中国春麦粉10-50g，于50-500ml的 50-90％乙醇溶液抽提4-10小时，然后继续通过LD20柱层析技术进行常规 纯化，取分子量为35KD-55KD部分进行以下实验；②吸取上述①两性蛋白质醇溶液0.1-1.0ml，放入旋转瓶中，水泵抽掉保护 液，于旋转瓶中形成一极薄层膜，称为固态两性蛋白质载体；③用0.1-1.0ml兔抗人荧光抗体加入上述②固态两性蛋白质载体中，旋转旋 转瓶，使载体由脱水状态即刻吸液膨胀复原成载兔抗人荧光抗体的球形体， 称为载荧光抗体的两性蛋白质转染药物试剂。④吸取对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 0.1-10ml加入上述③所述载荧光 抗体的两性蛋白质转染试剂中，混匀后放入37℃5％浓度二氧化碳的恒温 培养箱中转染3-5小时，漂洗杂(未转入细胞内的荧光抗体)荧光后再于 荧光显微镜下，可观察到具有荧光实体的转染有荧光抗体的小鼠骨髓瘤细 胞；以上为广谱性载药两性蛋白质转染药物试剂的制备方法；⑤两性蛋白质醇溶液的制备方法同①所述，吸取两性蛋白质醇溶液200-600 μl，抽干保护液，或半抽干保护液，继续加入0.6％-2.5％的戊二醛PB缓 冲液400μl中，再漫漫加入羊抗兔荧光抗体200μl，混匀后暗处室温放置 2-3小时；⑥在荧光显微镜下观察⑤中所述靶向性两性蛋白质转染试剂可看到空心的并 具有荧光的载体囊壁；⑦用上⑤所述转染试剂在暗处抽掉液体并使靶向性两性蛋白质转染试剂固化 于旋转瓶中形成一极薄的膜；用0.1-1.0ml Evan′s兰加入于旋转瓶中旋转 旋转瓶，使脱水的靶向载体即刻吸液复原转化成载入Evan′s兰，成为载 Evan′s兰的靶向性两性蛋白质转染试剂；⑧取兔红血球0.1-1.0ml与靶向性载Evan′s兰的两性蛋白质转染试剂混合， 于37℃温度下共同培养1-5小时；在显微镜下可观察到兔红血球与靶向性 两性蛋白转染试剂的亲和现象；以上为靶向性载药两性蛋白转染试剂的制备方法。