虫荧光素酶标记方法

摘要

提供了一种将虫荧光素酶与一种化学本体结合的方法，具体地是与一类特异的结合剂如抗体，抗原或核酸，以及更具体地说是一种抗体结合的方法，它包括(a)将虫荧光素酶与一种或多种D-虫荧光素，镁离子和腺苷三磷酸混合以及(b)用共价偶联剂在虫荧光素酶和结合剂之间进行共价偶联反应，其中D-虫荧光素，镁离子和/或腺苷三磷酸的量足以保护虫荧光素酶的活性免受共价偶联剂的抑制。优选步骤(a)的操作是将虫荧光素酶与其底物在溶液中混合并优选镁和腺苷三磷酸二者以腺苷三磷酸镁的形式存在(Mg²⁺ATP)，可选择地与D-虫荧光素一起使用。本发明第二个方面由本发明的方法提供了一种包含与活性虫荧光素酶结合的化学本体的标记的化学本体。优选化学本体是一种适于特异的结合测试应用的结合剂，优选是抗体、抗原或核酸。当结合剂是核酸时，优选寡核苷酸，但可以是多核苷酸或单个核苷酸，并且可被用做杂交探针或链延伸引物，例如PCR引物。最好本体是一种以前曾试图用于与虫荧光素酶偶联，但结果却是无活性的抗体。另外还提供了检测试剂盒。

主权项

1.一种将虫荧光素酶与化学本体结合的方法，它包括(a)将虫荧光素酶与一种或多种D-虫荧光素，镁离子和腺苷三磷酸混合和(b)用共价偶联试剂进行虫荧光素酶和化学本体之间的共价偶联反应，其中D-虫荧光素，镁离子和/或腺苷三磷酸的量足以保护虫荧光素酶活性免受共价偶联试剂的抑制。