马来亚腹蛇似凝血ancrod之cDNA的核牿酸序列及其似凝血ancrod的胺基酸序列

摘要

本发明系有关于分离出马来亚腹蛇（Calloselasma rhodostoma ) 毒腺中似凝血Ancrod之互补基因cNDA，及解读出该cNDA之核酸序列；并此cNDA为模板，从事Ancrod的生产；或者以此cNDA为材料，经切割或更改部份核酸后从事似凝血Ancrod的生产。Ancrod是一种具有水解纤维蛋白原（fibrinogen）功能的蛋白质，可防止青脉血管栓塞之生成，具医药价值。本发明中分离并解读Ancrod之cNDA及其序列，更一步利用遗传工程大量生产，以从事其在医药及分子方面的研究。

主权项

1. 完整之马来亚腹蛇似凝血ancrod之cDNA的核 酸序列(其中178至951为转译区):2. 完整之马来亚腹蛇似凝血ancrod的胺基酸序列(1至234)及其前驱胜(-24至-1)的胺基酸序列:图示简单说明:第1图表示依据巴特罗克索宾之N-终端之氨基酸残基之核酸序列合成出具有20个低聚粒 酸之探子(以线条框位者)。第2图表示用来得出cDNA纯群J-5之核 酸序列之部份限制图及序列测定法。其中箭头表示测定序列时反应之方向,黑框表示最长的开放读码架构。第3图表示Ancrod cDNA J-5之核 酸序列及推定的Ancrod前体蛋白质之氨基酸序列。其中左边的数字代表核酸残基之数目,右边的数字代表氨基酸残基之数目。氨基酸数目开始于N-终端之氨基酸,即Ancrod之缬氨酸。推定的信号胜(prepetide)及原胜(propeptide)分别涵盖氨基酸残基-24至-7,及-6至-1。箭头表示推断的切断位置。星号表示参与催化反应之推断的氨基酸残基。以线条框位推定的糖 化位置,并以下方画线表示聚腺 酸化信号序列AATAAA。第4图表示Ancrod前体、巴特罗克索宾前体、弗拉佛克索宾、牛凝血、牛胰蛋白及人类的激释放(kallikrein)之氨基酸序列之排列。其中所标之数字自Ancrod之N-终端之残基开始算起。并藉由间隔之导入使得序列可得最佳之同源性。星号表示参与催化反应之氨基酸残基。第5图表示转送载体pBac PAK1之构筑,本程序中利用Baculovirus expression system,以遗传工程生产似凝血Ancrod。第6图表示利用Oligonucleotide-mediated,site-directed mutagenesis方法,以更改此cDNA之部份核 酸