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1.一种冷光分析之酵素综合配方,其系用于侦测尿 素,包括0.1~100 U/mL之尿素醯胺分解(urea amidolyase( URL),110-6~510-2 mg/mL之萤火虫萤光素,0.1~5000 M 之虫萤光素,1 M~20 mM之硫酸镁,0.5~5000 M之ATP,0~ 100 mM之氯化钾,0~100 mM之碳酸氢钠,0~20 mM之EGTA,0~1% 之BSA,0~50 mM之DTT(1, 4-二硫赤藻糖醇(1, 4- dithioerythritol)),以及5~200 mM之pH6~8的缓冲液。 2.如申请专利范围第1项所述之冷光分析之酵素综 合配方,其中当以溶液状态使用时,该配方包括0.1~ 50 U/mL之尿素醯胺分解(urea amidolyase(URL),510-4~210 -2 mg/mL之萤火虫萤光素,5~2000 M之虫萤光素,1 M~5 mM之硫酸镁,0.5~1000 M之ATP,0~40 mM之氯化钾,0~ 40 mM之碳酸氢钠,0~10 mM之EGTA,0~0.5%之BSA,0~40 mM之DTT(1 , 4-二硫赤藻糖醇(1, 4-dithioerythritol)),以及25~50 mM之 pH6~8的缓冲液。 3.如申请专利范围第1项所述之冷光分析之酵素综 合配方,其中当以冷冻乾燥粉末状态使用时,该配 方包括0.1~50 U/mL之尿素醯胺分解(urea amidolyase(URL ),0.1~310-2 mg/mL之萤火虫萤光素,5~2000 M之虫萤 光素,1 M~5 mM之硫酸镁,0.5~3000 M之ATP,0~40 mM之氯 化钾,0~40 mM之碳酸氢钠,0~10 mM之EGTA,0~0.5%之BSA,0~40 mM之DTT(1, 4-二硫赤藻糖醇(1, 4-dithioerythritol)),以及 25~50 mM之pH6~8的缓冲液。 4.如申请专利范围第1项所述之冷光分析之酵素综 合配方,其中当以冷冻乾燥粉末状态使用于侦测血 清中尿素时,该配方包括0.1~50 U/mL之尿素醯胺分解 (urea amidolyase(URL),0.1~310-2 mg/mL之萤火虫萤光素 ,5~2000 M之虫萤光素,1M~5 mM之硫酸镁,0.5~ 1000 M之ATP,0~40 mM之氯化钾,0~40 mM之碳酸氢钠,0~10 mM之 EGTA,0~0.5%之BSA,0~40mM之DTT(1,4-二硫赤藻糖醇(1,4- dithioerythritol)),以及25~50 mM之pH6~8的缓冲液。 5.如申请专利范围第1~4项任一项所述之冷光分析 之酵素综合配方,其中该缓冲液系择自以下所组成 之族群:Gly-gly缓冲液,HEPES,Tris,Bis-Tris,Bis-Tris丙烷, MOPS,PIPES,磷酸盐,以及硼酸盐。 6.如申请专利范围第5项所述之冷光分析之酵素综 合配方,其中该缓冲液系pH7.5之Gly-gly缓冲液。 7.一种使用申请专利范围第1项所述之酵素综合配 方之冷光分析仪,其系组合一离心元件以及一冷光 侦测元件,且其特征在于该离心元件具有一可绕其 本身中心轴线旋转之中空圆柱体以及一位于该中 空圆柱体底部之旋转马达,其中该中空圆柱体包括 一内壁与一外壁,该内壁与该外壁互通,且该外壁 近中空圆柱体底部具有复数个放射对称之延伸开 口,其中该冷光侦测元件系对应于该离心构件之一 延伸开口位置。 8.如申请专利范围第7项所述之使用申请专利范围 第1项所述之酵素综合配方之冷光分析仪,其更包 括一滤膜,包覆于内壁中。 9.如申请专利范围第8项所述之使用申请专利范围 第1项所述之酵素综合配方之冷光分析仪,其中该 滤膜为醋酸纤维(acetate cellulose)、硝酸纤维(nitrate cellulose)、聚醚(Polyethersulfone,PES)、或聚乙烯 咯酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)。 10.一种分析尿素浓度的方法,包括: 提供一生物样本; 提供一尿素冷光分析酵素配方,包括0.1~100 U/mL之尿 素醯胺分解(urea amidolyase (URL),110-6~510-2mg/mL之 萤火虫萤光素,0.1~ 5000 M之虫萤光素,1 M~20 mM 之硫酸镁,0.5~5000 M之ATP,0~100 mM之氯化钾,0~100 mM 之碳酸氢钠,0~20 mM之EGTA,0~1%之BSA,0~50mM之DTT(1,4-二 硫赤藻糖醇(1,4-dithioerythritol)),以及5~200 mM之pH6~8的 缓冲液;以及 混合该尿素冷光分析酵素配方与该生物样本,以分 析该生物样本中之尿素浓度,其中该生物样本不须 进行前处理,该尿素浓度的范围介于2.5-50 mM,且分 析的时间在10分钟以内。 11.如申请专利范围第10项所述之分析尿素浓度的 方法,其中该尿素浓度的范围介于2.5-37.5 mM。 12.如申请专利范围第10项所述之分析尿素浓度的 方法,其中该分析的时间在1分钟以内。 13.如申请专利范围第10项所述之分析尿素浓度的 方法,其中该生物样本的体积为10 l。 14.如申请专利范围第10项所述之分析尿素浓度的 方法,其中该尿素冷光分析酵素配方为冷冻乾燥粉 末状态。 图式简单说明: 第1A图显示侦测肌酸酐时冷光讯号与添加时间的 关系图。 第1B图显示光讯号强度改变量对肌酸酐添加浓度 的关系图。 第2A图显示在不同浓度之肌酸酐存在下以溶液状 态进行肌酸酐测量之萤光强度对时间的关系图。 第2B图显示以溶液状态进行肌酸酐测量试验之校 正曲线。相对强度系由如第2A图之标准化之冷光 强度曲线的综合结果所计算出,其时间间隔为50-90 秒间。 第3A图显示不同浓度之肌酸酐存在下以冷冻乾燥 状态进行肌酸酐测量之萤光强度对时间的关系图 。 第3B图显示以冷冻乾燥状态进行肌酸酐测量试验 之校正曲线。相对强度系由如第3A图之标准化之 冷光强度曲线的综合结果所计算出,其时间间隔为 20-60秒间。 第4A图显示不同浓度之肌酸酐存在于血清中以冷 冻乾燥状态进行肌酸酐测量之综合面积对时间的 关系图。 第4B图显示血清中肌酸酐之测量试验的校正曲线 。相对强度系由如第4A图之标准化之冷光强度曲 线的综合结果所计算出,其时间间隔为0-200秒间。 第5A图显示不同浓度之尿素存在下以溶液状态进 行尿素测量之萤光强度对时间的关系图。 第5B图显示溶液状态进行尿素测量试验之校正曲 线。相对强度系由如第5A图之标准化之冷光强度 曲线的综合结果所计算出,其时间间隔为60-70秒间 。 第6A图显示不同浓度之尿素存在下以冷冻乾燥状 态进行尿素测量之萤光强度对时间的关系图。 第6B图显示以冷冻乾燥状态进行尿素测量试验之 校正曲线。相对强度系由如第6A图之标准化之冷 光强度曲线的斜率差异所计算出,其时间间隔为130 -180秒间。 第7A图显示不同浓度之尿素存在于血清中以冷冻 乾燥状态进行尿素测量之萤光强度对时间的关系 图。 第7B图显示血清中尿素试验之校正曲线。相对强 度系由如第7A图之标准化之冷光强度曲线的综合 结果所计算出,其时间间隔为0-60秒间。 第8A图显示不同浓度之尿酸存在下以溶液状态进 行尿酸测量之萤光强度对时间的关系图。 第8B图显示以溶液状态进行尿酸测量试验之校正 曲线。相对强度系由时间间隔0-6分钟间综合面积 所计算出(方法1)。若相对强度小于400,标准化强度 系再除以10-30秒间之斜率综合面积而计算得,以提 供低含量范围之尿酸的更佳解析度(方法2),如图中 之小图。 第9A图显示不同浓度之尿酸存在下以冷冻乾燥状 态进行尿酸测量之萤光强度对时间的关系图。 第9B图显示以冷冻乾燥状态进行尿酸测量试验之 校正曲线。相对强度系由如第9A图所示之标准化 的冷光强度曲线的综合结果所计算出,其时间间隔 为0-5分钟/最大波峰。 第10A图显示不同浓度之尿酸存在于血清中以冷冻 乾燥状态进行尿酸测量之综合面积对时间的关系 图。 第10B图显示血清中尿酸试验之校正曲线。相对强 度系由时间间隔0-5分钟间综合面积所计算出。 第11A图显示不同浓度之葡萄糖存在下以溶液状态 进行葡萄糖测量之萤光强度对时间的关系图。 第11B图显示以溶液状态进行葡萄糖测量试验之校 正曲线。相对强度系由如第11A图中标准化萤光强 度曲线之综合结果计算得,其时间间隔为0-3分钟。 第12A图显示不同浓度之葡萄糖存在下以冷冻乾燥 状态进行葡萄糖测量之强度对时间的关系图。 第12B图显示以冷冻乾燥状态进行葡萄糖测量试验 之校正曲线。相对强度系由如第12A图之波峰高度 所计算出,其时间间隔为0-2分钟。 第13A图显示不同浓度之葡萄糖存在于血清中以冷 冻乾燥状态进行葡萄糖测量之综合面积对时间的 关系图。 第13B图显示血清中葡萄糖试验之校正曲线。相对 强度系由时间间隔0-30秒间综合面积所计算出。 第14图显示本发明实施例之小型冷光分析仪。 |
