抗生素GE2270的制备方法

摘要

本发明涉及一种新的命名为抗生素GE2270的抗生素物质，其加成盐、药物组合物以及它们作为药物的应用，特别是用于治疗涉及对其敏感微生物的感染的疾病。

主权项

1.具有如下特征的非盐形式的抗生素GE2270因子A的制备方 法： A)紫外吸收光谱呈现出如下的最大吸收值： E_1cm^1％γ_max(nm) 0.1MHCl245(肩峰) 310 0.1MKOH245(肩峰) 313 pH7.4的磷酸盐缓冲液245(肩峰) 314 甲醇244(肩峰) 265310 B)石蜡糊中的红外吸收色谱呈现如下的最大吸收值(cm^-1)： 3700-3060；3060-2660(液体石蜡)；1650，1590，1490； 1490-1420(液体石蜡)；1375(液体石蜡)；1310；1245；1210； 1165；1090；1060；1020；970；930；840；810；750；720(液体 石蜡)；700；该图谱的主要官能红外吸收带可归成为： v，(cm^-1)指定 3600-3100VNH.VOH 1650酰胺I(vc＝0) 1545杂环VC＝C和VC＝N 1524，1495酰胺II(δNH) 1250，1205芳香族δCH 870杂环γCH 745,700芳香族γCH C)以TMS作内标(0.00ppm)在DMSO-d₆(六氘二甲基亚 砜)中的¹H-NMR图谱在500MHz显示出的各组信号(ppm)如 下：每一信号的质子数标在括号内 9.02(1)；8.68(1)；8.70(1)；8.57(1)；8.50(1)；8.43 (1)；8.37(1)；8.26(1)；8.25(1)；7.4-7.20(9)；6.96(2)； 6.02(1)；5.30-5.18(3)；5.01(1)；4.97(2)；4.80(1)；4.56 (1)；4.30(1)；4.26(1)；3.98(1)；3.81(1)；3.79(1)；3.38 (3)；2.72(1)；2.58(3)；2.48(3)；2.16(1)；2.13(1)；1.96 (2)；1.88(1)；1.34(1)；0.87(3)；0.84(3)； D)以TMS作内标(0.00pm)在DMSO-d₆中的¹³C-NMR 图谱在125MHz显示出的各组信号(ppm)如下，Q代表四价碳原子 或C＝O基团； 173.69，Q；171.10，Q；169.83，Q；169.51，Q；168.45， Q；168.26，Q；167.84，Q；165.68，Q；164.75，Q；161.40，Q； 161.23，Q；160.46，Q；160.29，Q；159.35，Q；153.42，Q； 150.31，Q；150.11，Q；149.41，Q；146.93，Q；144.73，Q； 143.75，Q；142.10，Q；141.78，Q；141.33，CH；140.97，Q； 139，53，Q；128.68，CH；127.99.2〔CH〕；127.67，Q；127.67， CH；126.88，CH；126.76，2〔CH〕；123.17，CH；118.66，CH； 116.43，CH；73.81，CH；69.41，CH₂；67.97，CH；67.36， CH₂；60.12，CH；58.63，CH₃；58.24，CH；55.41，CH；48.15， CH；47.03，CH₂；41.19，CH₂；37.60，CH₂；34.06，CH； 29.76，CH₂；25.85，CH₃；24.28，CH₂；18.49，CH₃；17.98， CH₃；11.99，CH₃； E)在下述条件下进行反相HPLC分析时，保留时间(Rt)为 14.9分钟： 柱：U1trasphereODS(反相硅烷化硅胶；5微米) A1tex(Beckman)4.6mm(i.d)×250mm 前置柱：Brownlee1absRP18(八癸基硅烷硅胶；5微米)； 洗脱剂A：乙腈∶18mM磷酸钠70∶30(V/V)，调至pH7.0 洗脱剂B：乙腈∶18mM磷酸钠10∶90(V/V)，调至pH7.0 洗脱方式：在20分钟内洗脱剂A在洗脱剂B中从45％至70％ 的线性梯度洗脱 流速：1.8ml/min 紫外检测器：254nm 内标：氯霉素(Rt＝3.7分钟) F)在惰性气氛下，在约140℃将样品预先干燥后进行元素分 析，结果表明有如下组成：碳、氢、氮、硫； G)在如下色谱系统中Rf值为0.37：二氯甲烷∶甲醇为9∶1 (V/V)，使用硅胶板(硅胶60F₂₅₄；MerckCo)；显色；紫外线 254nm，使用碘蒸气或用在最低量Davis培养基中枯草杆菌 (B.Subtilis)ATCC6633的生物自检法，呈黄色色斑；内标：氯霉素 (Rf0.56) H)FAB-MS分析在质/荷比(m/z)1290.3±0.1道尔顿显示 出质子化分子离子的最低质量同位素；在下述实验条件下，用 KratosMS-50双聚焦质谱仪分析，在图谱中所有具有高于800m/z 质量单位的峰(同位素峰不计)低于分子离子的20％；以6千伏Xe快原子轰击，甘油基质；阳离子化方式； I)盐酸水解氨基酸分析表明有如下天然氨基酸存在：甘氨酸、 (L)脯氨酸和(L)丝氨酸，实验条件如下： 样品在存在含1％苯酚的6NHCl下，在105℃水解20小时，然 后按如下两步衍生： a)用在无水丙醇中的2MHCl使羧酸官能团生成正丙酯 (90℃，1小时)，然后在氮气氛下干燥； b)在室温下用五氟丙酸酐/无水二氯甲烷(1/9，V/V)将 游离氨基转化为酰胺，进行一小时，然后在氮气氛下干燥；将如此获 得的衍生物溶解于二氯甲烷中，并在如下条件下，使用HP5985B系 统进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析：柱：将手性正-丙酰-L-缬 氨酸叔丁酰胺聚硅氧烷涂于熔凝的二氧化硅毛细管柱上(25m× 0.2mm直径；毛细管气相色谱(C.G.C)法分析)；温度方案， 80℃4分钟，然后每分钟4℃； L)离子化研究 通过在甲基溶纤剂/水中的0.1NHCl和0.1NNaOH滴定检测 不到离子基团；在非水基质(乙酸)中的0.1NHClO₄滴定显示弱的 碱性基团； M)旋光率 〔α〕_D²⁰＝+140.8；无水乙醇，浓度约5克/升 该方法包括在可同化的碳源、氮源及无机盐存在下，在浸没需氧 条件下培养玫瑰游动双孢菌(Planobisporarosea)CGMCC0141， 并从中回收所产生的抗生素。