增幅及侦测肠炎弧菌核酸之引子及方法

摘要

一种简易快速且灵敏之侦测样品中肠炎弧菌热稳定性溶化素基因(tdh)存在之方法。利用二个低聚核酸当做引子，可特异性的离交于其互补股之肠炎弧菌 tdhDNA，此二个引子之间所夹的DNA片段可如以增幅放大以供侦测。所进行的方法如下述步骤：(A)引子杂交于细菌样品的特定基因序列，如入四种混合好之去氧核糖核(dNTPs)、 DNA合成及酵素缓冲液，以制成双股DNA序列；(B)制成产物可经高温加热处理后将双股DNA打开成二股，再将引子杂交于其互补股，如此反覆进行聚合连锁反应(PCR)25次，以提供一个增幅的核酸片段；(C)决定此特异的核酸片段是否存在于样品中，以确认于热稳定性溶血素基因之肠炎弧菌的存在。

主权项

1.一种与肠炎弧菌tdh基因标的区域或其互补股之 DNA杂交 之低聚核 酸引子,其中该引子具有之核 酸序列为 TGG TTG ACA TCC TAC ATG ACT GTG (VP21,序列编号第1号) 或其相对应互补股(CAC AGT CAT GTA GGA TGT CAA CCA) ,或上述两序列中至少14个与引子相同之核 酸序列 为其 杂交序列。2.一种与肠炎弧菌tdh基因标的区域或 其互补股之DNA杂交 之低聚核 酸引子,其中该引子具有之核 酸序列为 GGG GAT CCC TCA GTA CAA AGC CTT (VP22,序列编号第2号) 或其相对应互补股(AAG GCT TTG TAC TGA GGG ATC CCC) ,或上述两序列中至少14个与引子相同之核 酸序列 为其 杂交序列。3.一种可放大肠炎弧菌tdh基因标的区 域或其互补股之DNA 低聚核 酸引子对,其中第一引子具有核 酸序列为 TGG TTG ACA TCC TAC ATG ACT GTG (VP21,序列编号第1号) ,或该引子中至少14个核 酸之序列为其杂交序列, 而第 二引子具有核 酸序列为具GGG GAT CCC TCA GTA CAA AGC CTT (VP22,序列编号第2号),或该引子中至少14个 核 酸之序列为基杂交序列。4.一种侦测检体中所 含肠炎弧菌之方法,系以聚合连锁 反应进行增幅作用,其包含: (a)使用依据申请专利范围第1.2项之引子或第3项之 引子 对增幅该肠炎弧菌核酸之tdh基因区域 (b)侦测由该核 酸增幅后之核酸片段 (c)由(b)所得结果可判定目的核酸序列是否存在,以 判定 检体中肠炎弧菌之存在。5.依据申请专利范围第1 或2项之低聚核 酸引子,其中至 少十四个核 酸序列可当做低聚核 酸探针,在其他 种类 之固体支持物上可监别出其所含之目标核酸序列 。图示简单说明: 图一系显示选自表一所示含tdh基因肠炎弧菌之专 一性试