发明名称 供特定分析血管收缩素 用之套件及方法
摘要 本发明系关于一种供特定分析血管收缩素Ⅱ用之方法,包括下列步骤:a) 制备包括下列之反应培养基:- 待分析之生物流体萃取物,- 抗 AngⅡ抗体,- 标记之 AngⅡ,- 抗 AngⅡ抗体,- 及选择性地,抗 AngⅠ抗体及/或抗五抗体及/或抗六抗体;b) 同时制备可用于校准之反应培养基,各包含下列:-AngⅡ标准品,- 抗 AngⅢ抗体,- 及选择性地,抗 AngⅠ抗体及/或抗五肱抗体及/或抗六抗体;c) 令培养基培基于4℃与室温间之温度12至72小时;d) 结合于抗 AngⅡ抗体之 AngⅡ系由自由态 AngⅡ分离;e) 最后根据适宜方法读取结果。本发明亦有关供特定分析血管收缩素Ⅱ用之套件,包括:- 抗血管收缩素(Ang)Ⅱ抗体,- 标记之 AngⅡ之溶液,- 含已知且增加浓度之 AngⅡ标准品之溶液,-必要之洗液,- 抗AngⅢ抗体之溶液,该抗体与少于10%且较佳少于5%之 AngⅡ2显现交叉反应,- 以及,选择性地抗 AngⅠ抗体之溶液及/或抗五抗体之溶液及/或抗六抗体之溶液,该抗体与少于10%且较佳少于5%之AngⅡ显现交叉反应。
申请公布号 TW262536 申请公布日期 1995.11.11
申请号 TW080105232 申请日期 1991.07.05
申请人 沙诺费合夥事业公司 发明人 多明尼昆.赛蒙;伯那德.罗米斯塔德;格伯瑞尔.巴杜艾利;健.马查德;健–艾伦.菲雷兹
分类号 C12N15/02;G01N33/577 主分类号 C12N15/02
代理机构 代理人 陈长文 台北巿敦化北路二○一号七楼
主权项 1.一种用以特异分析血管收缩素Ⅱ(Ang II)之套件, 包括 : —亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗—AngⅡ抗体, —经标记之Ang Ⅱ之溶液, —含已知且增加浓度之Ang Ⅱ标准品之溶液, —必须之洗液,及 —抗—血管收缩素Ⅲ(Ang Ⅲ)抗体之溶液,其中该抗 体显 示与少于10%且较佳少于5%之Ang Ⅱ有交叉反应,且该 抗 —Ang Ⅲ抗体系以具式 H—X@ss1—Tyr—Ile—His—R@ss1—R@ss2—Cys—NH@ss2 之衍生物免疫动物所得 其中R@ss1为Pro, R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—基团,其中n=5, 且 X@ss1为Arg—Val二残基。2.根据申请专利范围第1 项之套件,其另含一种抗—五 抗体,系以式H—X@ss1—Tyr—Ile—His—R@ss1—R@ss2 —Cys—NH@ss2之衍生物免疫动物所得, 其中R@ss1为Pro, R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—基团,其中n=5, 且 X@ss1为一直接键, 其中该抗-五抗体显示,与少于10%之Ang Ⅱ有交叉 反应 。3.根据申请专利范围第1或2项之套件,其中该Ang Ⅱ系经 标记。4.根据申请专利范围第3项之套件,其另包 含一种含有用 以标记Ang Ⅱ之之溶液,及选择性地包括一或多 种用以 使活性显现用之试剂,及停止反应之溶液。5. 根据申请专利范围第1或2项之套件,其中该Ang Ⅱ系 以 萤光化合物,或以发光化合物,或以放射元素标记 。6.根据申请专利范围第1或2项之套件,其中该抗 —Ang Ⅱ 抗体为单株或多株抗体。7.根据申请专利范围第1 或2项之套件,其中该亲和力至少 为10@su1@su1M@su-@su1之抗—AngⅡ抗体系单株抗体4D8 。8.根据申请专利范围第1或2项之套件,其中该抗 —Ang Ⅱ 抗体系含于溶液中。9.根据申请专利范围第1或2项 之套件,其中该抗—Ang Ⅱ 抗体系结合于固体支撑物上。10.根据申请专利范 围第9项之套件,其中该固体支撑物为 试管、微滴定盘或颗粒。11.根据申请专利范围第 10项之套件,其中该颗粒具磁性 。12.根据申请专利范围第1或2项之套件,其中该抗 —Ang Ⅲ及抗五抗体为单株或多株抗体。13.根据申请 专利范围第12项之套件,其中该抗体为多株 兔抗血清。14.一种抗—Ang Ⅲ抗体,系以下式之 衍生物免疫动所 得: H—Arg—Val—Tyr—Ile—His—R@ss1—R@ss2—Cys—NH@ ss2 其中 R@ss1为Pro,且 R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—基团,其中n=5, 其中该衍生物系与一载体蛋白质结合,且其中该 抗— Ang Ⅲ抗体对AngⅢ有特异性,且显示与少于10%之Ang Ⅱ 有交叉反应。15.根据申请专利范围第14项之抗— Ang Ⅲ抗体,其中该 抗体显示与少于5%之Ang Ⅱ有交叉反应。16.一种抗 —五抗体,其系以具下式之衍生物免疫动 物所得 H—Tyr—Ile—His—R@ss1—R@ss2—Cys—NH@ss2 其中 R@ss1为Pro,且, R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—基团,其中n=5, 其中该衍生物系与一载体蛋白质结合,且其中该 抗—五 抗体对—Ang Ⅲ除去N—端二胺基酸残基之五 降解产 物有特异性,且显示与少于10%之Ang Ⅱ有交叉反应 。17.根据申请专利范围第16项之抗—五抗体,其 中该抗 体显示与少于5%之Ang Ⅱ有交叉反应。18.一种抗— 六抗体,其系以具下式之衍生物免疫动 物所得: H—Val—Tyr—Ile—His—R@ss1—R@ss2—Cys—NH@ss2 其中 R@ss1为Pro,且 R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—之基团,其中n=5 , 其中该系与一载体蛋白质结合,且其中该抗—六 抗体 对Ang Ⅲ除去N—端胺基酸残基之六降解产物有 特异性 ,且显示与低于10%之Ang Ⅱ有交叉反应。19.根据申 请专利范围第18项之抗—六抗体,其中该抗 体显示与少于5%之Ang Ⅱ有交叉反应。20.一种抗一 血管收缩素I(Ang I)抗体,其系以具下式之 衍生物免疫动物所得: H—Cys—R@ss2—R@ss3—Arg—Val—Tyr—Ile—His—Pro —Phe—His—Leu—OH 其中 R@ss2为式—NH—(CH@ss2)@ssn—CO—基团,其中n=5, R@ss3为Asp, 其中该衍生物系与一于载体蛋白质结合,且其中 该抗 Ang I抗体对AngI有特异性,且显示与少于10%之Ang Ⅱ 有 交叉反应。21.根据申请专利范围第20项之抗—Ang I 抗体,其中该抗 体显示与少于5%之Ang Ⅱ有交叉反应。22.一种分析 血管收缩素Ⅱ之方法,其中系使用根据申请 专利范围第1项之分析套件,其包含下列步骤: (a)制备包括下列之反应培养基: —待分析之生物流体之萃取物, —亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗—AngⅡ抗体, —经标记Ang Ⅱ,及 —抗Ang Ⅲ抗体, (b)同时制备可用于校准之反应培养基,各包含下列 : —Ang Ⅱ标准品, —亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗—AngⅡ抗体, —经标记Ang Ⅱ,及 —抗—Ang Ⅲ抗体; (c)令培养基于4℃与室温间之温度恒温培养12至72 小时; (d)使与抗—Ang Ⅱ抗体结合之Ang Ⅱ与由自由态Ang Ⅱ 分离; (e)最后,根据适宜之方法读取结果, 其中该抗—Ang Ⅲ抗体系如申请专利范围第14项所 定义。23.根据申请专利范围第22项之方法,其中反 应培养基(a) 及/或用以校准之培养基(b)另含根据申请专利范围 第16 项之抗—五抗体。24.根据申请专利范围第22项 之方法,其中系藉由混合下 列进行步骤a)与b): —将25至500微升之待分析生物流体萃取物或Ang Ⅱ 标准 品,与含下列之培养基混合: —25至500微升亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗— AngⅡ抗体之溶液, —25至500微升之抗—Ang Ⅲ抗体之溶液, —选择性地,25至500微升之抗—五抗体溶液,及 —25至500微升之经标记Ang Ⅱ溶液。25.根据申请专 利范围第24项之方法,其中系藉由混合下 列进行步骤a)与b): —25至500微升之待分析生物流体萃取物或Ang Ⅱ标 准品 ,与含下列之培养基混合: —25至500微升亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗 AngⅡ抗体溶液, —25至500微升之抗—Ang Ⅲ抗体溶液,及 —25至500微升之经标记Ang Ⅱ溶液。 10.根据申请专利范围第22项之方法,其中系使用亲 和力 至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗体—Ang Ⅱ抗体涂布之 试管进行步骤a)与b),其中: —将25至500微升之待分析生物流体萃取物或Ang Ⅱ 标准 品与含下列之培养基混合: —25至500微升之抗Ang Ⅲ抗体溶液, —25至500微升之经标记Ang Ⅱ溶液,且 步骤d)之进行系自反应培养基吸除培育溶液,接着 洗涤, 并再抽吸以除去未与结合于固体支撑物上之抗体 复合之 Ang Ⅱ。 27.根据申请专利范围第22项之方法,其中该抗—Ang Ⅱ 抗体系结合于颗粒上。 28.根据申请专利范围第27项之方法,其中颗粒具有 磁性 。 29.根据申请专利范围第22—28中任一项之方法,其 中该 亲和力至少为10@su1@su1M@su-@su1之抗体—Ang Ⅱ抗体 系单株抗体4D8。 30.根据申请专利范围第22项之方法,系用于血浆萃 取物
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