| 摘要 |
<p>Le procédé à hybride double inverse a été conçu pour permettre d'utiliser de façon pratique et efficace des méthodes à base de cellules de levure dans le but de dépister des molécules pouvant inhiber les interactions protéine-protéine, objet de l'étude. Les systèmes à hybride double actuels impliquent la reconstitution dans la levure d'un activateur de transcription qui active l'expression d'un gène 'rapporteur' tel que HIS3 ou lacZ. Toute tentative visant à utiliser ces systèmes existants pour la découverte de médicaments impliquerait nécessairement le dépistage des molécules entravant la lecture de transcription, et risquerait de conduire à la détection de composés entravant de manière non spécifique cette transcription. De plus, étant donné que les gènes rapporteurs utilisés habituellement codent des protéines présentant une longue durée de vie, il serait nécessaire d'effectuer l'analyse pendant une longue période afin de permettre la décomposition des protéines rapporteuses existantes. La découverte de tout composé toxique pour la levure pendant cette période ferait abusivement figure de succès. L'interaction à hybride double inverse évite ces deux pièges car elle active l'expression d'un gène relais, tel que le gène GLA80, qui code une protéine se fixant au domaine d'activation d'un activateur de transcription, tel que Gal4, et masquant ce domaine d'activation. Les gènes rapporteurs qui permettent la lecture de transcription (HIS3 ou lacZ) dépendent du Gal4 fonctionnel pour l'expression. Le Gal4 fonctionne en tant qu'activateur de transcription, permettant ainsi une lecture de transcription positive des molécules qui inhibent l'interaction protéine-protéine à hybride double, uniquement lorsque le niveau de la protéine de masquage Gal80 est réduit par l'inhibition de l'interaction à hybride double. Le fait que le niveau basique et la demi-vie de la protéine relais Gal80 puissent être réglés avec précision afin de fournir une sensibilité maximale, constitue une caractéristique importante du système à hybride double inverse.</p> |
