GEN QUIMERICO CAPAZ DE CONFERIR RESISTENCIA TERMOESTABLE A KANAMICINA EN BACTERIAS TERMOFILAS DEL GENERO THERMUS.

摘要

EL GEN QUIMERICO CAPAZ DE CONFERIR RESISTENCIA TERMOESTABLE A KANAMICINA EN BACTERIAS TERMOFILAS DEL GENERO THERMUS ESTA CARACTERIZADO PARA CONFERIR RESISTENCIA AL ANTIBIOTICO KANAMICINA EN THERMUS THERMOPHILUS Y EN ESCHERICHIA COLI, DENTRO DE UN RANGO DE TEMPERATURAS COMPRENDIDO ENTRE 30 Y 80GC. EL GEN QUIMERICO HA SIDO CONSTRUIDO MEDIANTE UNA FUSION TRANSCRIPCIONAL ENTRE EL PROMOTOR DE UN GEN DE ALTO NIVEL DE EXPRESION PROCEDENTE DE THERMUS THERMOPHILUS HB8 DENOMINADO SLPA Y UN GEN DE RESISTENCIA A KANAMICINA MODERADAMENTE ESTABLE (KAT) PROCEDENTE DE BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS. LA CONSTRUCCION HA SIDO REALIZADA MEDIANTE LA REACCION DE LA POLIMERASA EN CADENA (PCR), INTRODUCIENDO POR MUTAGENESIS DIRIGIDA LA SECUENCIA DE RECONOCIMIENTO PARA LA ENDONUCLEASA DE RESTRICCION NDEI SOBRE EL PRIMER TRIPLETE CODIFICANTE DEL GEN DE RESISTENCIA A KANAMICINA. POSTERIORMENTE, HA SIDO INTRODUCIDO UN POTENTE TERMINADOR DE TRANSCRIPCION AL EXTREMO DE LA REGION CODIFICANTE QUE ESTABILIZA LA CONSTRUCCION.DICHO GEN QUIMERICO HA SIDO UTILIZADO COMO MARCADOR DE SELECCION PARA LA OBTENCION DE MUTANTES INSERCIONALES DE GENES DE THERMUS PREVIAMENTE CLONADOS Y PARA EL CLONAJE DE ORIGENES DE REPLICACION DE PLASMIDOS CRIPTICOS PROCEDENTES DE THERMUS Y EL SUBSIGUIENTE DESARROLLO DE PLASMIDOS BIFUNCIONALES ESCHERICHIA COLI-THERMUS.