摘要 |
Fremgangsmåte for in vivo amplifisering av en DNA-sekvens B som er til stede i et genom i en opphavs- celle, omfattende (a) integrasjon i et genom i cellen av en DNA-konstruksjon som omfatter strukturen C-M-A-D, hvor bads A og C betegner en DNA-sekvens som er homolog med et genom-DNA-fragment som enten flankerer eller overlapper DNA-sekvensen B som skal amplifiseres, eller som er en etterfølger til DNA- sekvensen B som utgjør en av endene til sekvensen B, hvor sekvensen C befinner seg i den motsatte ende av sekvensen B sammenlignet med A, D betegner en DNA- sekvens som er homolog med et genom- DNA- fragment som befinner seg lengst bort fra C sammenlignet med B, og M betegner en DNA-sekvens som koder for en utvelgelsesmarkør, (b) utvelgelse med hensyn på celler hvor DNA-sekvensen M er blitt integrert i genomet, hvor cellene omfatter, i hvilken som helst orientering, strukturen A-B-C-M-A-D, og (c) propagering av cellene utvalgt i trinn (b) under økende utvelgelsestrykk for å oppnå en celle som har fått et forøkt antall genomintegrerte kopier av DNA-sekvensene B og M. |