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1.一种带有D型肝炎病毒抗原之B型肝炎病毒表面抗 原颗粒 之制备方法,其系以分子生物学之方法,利用表现B 型肝 炎表面抗原的质体(pslx)及表现D型肝炎病毒之抗原 的质 体(大D为pSVLAg-L、小D为pSVLAg-S),以磷酸钙沈淀法 将前述所构筑之质体穿染入肝癌细胞株中,再将病 毒颗粒 予以纯化;该D型肝炎病毒抗原之B型肝炎病毒表面 抗原颗 粒分为两类:1)其中之D型肝炎病毒之抗原仅为大D 抗原, 其大D抗原的质体与表现D型肝炎病毒之质体共同 穿染入肝 癌细胞株内;2)其中之D型肝炎病毒之抗原同时包括 有大D 及小D抗原,其大D抗原质体与小D抗原质体以及表现 B型肝 炎病毒之质体共同穿染入肝癌细胞株内,其小D抗 原并不 能单独包裹入病毒颗粒内,而是藉由大D抗原而带 入B型肝 炎病毒抗原颗粒内;且其大D抗原与小D抗原之质体 与B型 肝炎病毒的质体,共同形成一B型D型肝炎抗原复合 颗粒。2.如申请专利范围第1项所述之方法,其中D 型肝炎病毒 抗原之B型肝炎病毒表面抗原颗粒所包含之两类病 均不含 有B及D型肝炎病毒基因体存在。3.如申请专利范围 第1项所述之方法,其中病毒颗粒之纯 化步骤为:a)为穿染后的细胞之组织培养液以高速 离心机 在10000 RPM 30分钟之条件下,以去除沈淀杂质;b)上 清液置于20蔗糖溶液;c)以超高速离心机在离心35000 RPM 16小时之条件下,将病毒沈淀下来;d)将沈淀颗粒 再 溶于磷酸钙缓冲之生理食盐水中;e)以平衡离心法 予以进 一步纯化;f)溶解好之病毒颗粒置于不连续梯度的 氯化铯 溶液(密度1.19至 1.51g/cmC^3C);g)以超高速离心机在35000转离心24小时 ;h)自离心机导出管以0.5ml一等分连续收集;i)收集 之 每一等分溶液以三倍体积之磷酸钙缓冲生理食盐 水在高速 离心机离心60000转,以将每等分的病毒颗粒沈淀下 来。 图一系显示pSVLD3含HDV全长之cDNA连续三个,它们在 Simian Virus40的起动子调控下,可表现大D及小D抗原 及HDV基因体之复制;图二系显示pSVLDm2含HDV全长之 cDNA的连续两个,它们也在SimianVirus 40的起动子调控 下,只可表现小D抗原,不能表现大D抗原,但可进行 HDV 基因体之复制;图三系显示pSVLAg-L含来自质体DD15的 BamHI-PstI DNA片段,SV40起动子之调控下,用来表现 大D抗原;图四系显示pS1x含HBV的ApaI-Bg1II基因片段, 用来表现三种HBsAg;图五A及图五B显示实施例一中 所制 备之颗粒是否含有大D抗原及HDVRNA之情形;图六系 显示 本发明第二个实施例中经穿染后之细胞组织培养 液经沈淀 、离心等密度等分之步聚之后,在第11,13,15,等分含 有大D抗原,亦同时含有HBV表面抗原;图七显示本发 明第 三实施例所制备之病毒颗粒内含有大D及小D抗原, 其大D |
