| 主权项 |
1﹒一种双特异性抗体,其系选自CD3/CD2 ,CD8/CD4和CD5/CD8,该双特异性 抗体可用于调节淋巴细胞且包含两个区域 ,而该区域可结合T或B淋巴细胞上之不 同表面抗原。图示简单说明: 图1示出比较性图解,周边血液淋巴 球经各种浓度的(A)CD3/CD4异质共 轭物,本发明一个具体实例,GI9一4/ Gl7一2,或(B)抗一CD3单株抗体, G19一4,经一段时间刺激后细胞内游离 ((Ca+2) i)浓度之增加。 图2示出比较性图解,周边血液淋巴 球(PB2)或CD4+T细胞与本发明之异质 共轭物CD3/CD4,Gl9一4/G17一2 经一段时间刺激后(Ga+2]i反应及反应 细胞之百分率。用抗一CD4单株抗单, G17一2做细胞之预处理,再用异质共轭 物刺激之抑制作用亦示出。 图3示出本发明之G19一4/ G17- 2异质共轭物( )或抗一CD3单株抗体 ,G19一4(口),于cD4+T细胞上在 5mMEGTA存在下(Ca+ 2)i活性之比较滴 定法。 图4示出比较性图解,CD4+ T细胞 与抗一CD3,Gl9-4( )或CD3/ CD4不发明之异质共轭物,Gl9一4/ Gl7一2( )在1微克/毫升下经过一 段时间刺激后肌醇磷酸之增加。示出肌醇 磷酸在未刺激控制组(o)于t=o 及t =10分钟时之水平。A列示出肌醇磷酸1 (Insp4)之增加,B列出肌醇磷酸2( !nsp2)之增加及C列示出肌醇磷酸3 (Insp3)之增加。 图5示二个独立的实验,其中Inspl 增加之测定是分将CD4+T细胞依序刺激 ,生物素一共轭的抗一CD4(G17一2) ,抗一CD3(G19–4),CD3//CD4异 质共轭物(G19一4/n7一2)或抗生 物素及其综合。 图6示抗一CD3单株抗体(CD3Mono ),CD3/CD3同质共轭物(CD3 Homo) ,CD4/CD4同质共轭物(CD4 Homo)及 CD3/CD4异质共轭物(本发明的CD3+ 4Heteor)于下细胞增殖上作用,以 CD+T细胞纳入(3H)一胸腺核| 示出 ,加或不加PMA(醋酸十四酯佛咱)或 CD028抗体。 之增殖反应以3H一胸腺核| 纳入对以下 各种抗体浓度作图,Gl9一4(CD3)Mono +PMA( 一 ) , Gl9一4+抗一CD28( |一CD28)(|一|),CD3/CD4异质 共轭物(CD3+4 Heter0)+PMA(| …| ),CD3/CD4异质共轭物十 一CD28( - - )或CD3/CD3同质共轭物+ | 一CD28(|- 一|)。 图8示出CD4+T细胞经PHA(植物 血球凝结素);CD3/CD4异质共轭物, Gl9一4/Gl7一2;CD3/CD3同质共 轭物G19一4/G19一4;CD3/CD8异 质共轭物(控制组),G19 -4/G10一 1;及CD4/CD4同质共轭物,Gl7一2 /G17一2刺激3天后,经过第一、第二 及第三细胞循之百分率。 图9示出比较性图解,T细胞经由已 固化之抗一CD31nAb Gl9一4诱导后其下 细胞增殖反应之抑制作用,由(3H)一 胸腺核| 纳入(单独(|)或对抗一 CD4mAb9.4(口),抗一p97mAb96.5(口) ,加(B)或不加(A )PMA作图示之( 于溶液中与抗一CD45mAb9.4之增殖(|) 亦示出比较,示出平均値,标准误差<15 %)。 图10示出下细胞被CD45受体讯号转导 调节之图解,由(Ca+2)i之增加来决定 ,经下细胞上交联受体一段时间作用或与 抗一cD45mAb9.4或抗一CD45RmAb 3AC5一 起作用,如下文实例4中所述。(( Ca+2)i之平均値示于左侧,反应细胞百 分率示于每一实验右侧; 箭号表示加入 ,bs或抗生物素之时间) 图11描述由融合融合瘤所产制如实施 例5infra所述之10种型式之抗体。 图12系描述藉由本发明双特异性抗体 于下细胞所作的讯号转换之调节的图形, 该讯号之转换系如实施例6infra所述者 藉由(Ca+2)i浓度之增加而加以决定。 (12A示(Ca+2)i平均値,12B 示反应 细胞之百分比,箭号示抗体增加之时间(一)示45.g之 CD4/CD5双特异性抗 体,(……)示45.g之单独CD5抗体, (-------)示45g单独CD4抗体,以 及(----)示22.5.g CD5 抗体与22.5.g CD4抗体之混合物。) 图13描述于CD3+CEMT细胞系中在酩 氨酸位置上磷酸化之基质(即,于0.2和 5分锺之时间序列上藉由适当酪氨酸激| 之活化作用),该基质系和不同的刺激物 反应,而该刺激物系包含分别使用之CD3 ,CD4和CD8抗体(时间序列B,C和D ),或其混合物(CD3+CD4混合物,和 CD3+CD8混合物;时间序列E和H) 或融合(双特异性)抗体(CD3/CD54融 合抗体和CD3/CD8融合抗体;时间序列 下和I),或异质共轭抗体(CD3/CD4 异质共轭体和CD3/CD8异质共轭物;时 间序列G和J),此如实施例6infra所 述者。 图14描述于酪氨酸位置上不同基质之 磷酸化作用所测定之酪氨酸激|活性,其 系如实施例6infra所述。且同时,同14 亦包含CD5和CD4之单独抗体(时间序列 B和F),或其混合物(CD5十CD4混合 ;时间序列C),或一融合(双特异性) 抗体(cD5+CD4融合抗体;时间序列D ),或一抗体共轭物(CD5/CD4异质共 轭物;时间序列E) 图15描述于酪氨酸位置上不同基质之 磷酸化作用所测定之酪氨酸激| 活性,其 系如实施例61nfra所述。且同时,图15 亦包含CD5和CD8之单独抗体(时间序列 B不F),或其混合物(CD5+CD8混合 ;时间序列C),或一融合(双特异性) 抗体(CD5+CD8融合抗体;时间序列D ),或一抗体共轭物(CD5/CD8异质共 轭物;时间序列E) |
