AMPLIFICATION OF TARGET NUCLEIC ACIDS USING GAP FILLING LIGASE CHAIN REACTION.

摘要

Un mode de réalisation de "remplissage d'espaces vides" amélioré, de la réaction en chaîne de la ligase (RCL) est décrit. Le remplissage d'espaces vides par RCL se fait au moyen d'une RCL dans laquelle au moins une des sondes est pourvue d'un évidement de sorte qu'un espace vide soit formé entre les sondes adjacentes lorsqu'elles sont hybridées en la cible. L'espace vide est comblé à l'aide d'une polymérase et des triphosphates de désoxyribonucléotides avant la liaison des sondes. Il y a des versions à simple et à double espaces vides selon qu'une ou les deux sondes sont pourvues d'un évidement et nécessitent le remplissage avant la liaison. L'amélioration réside dans la sélection et l'utilisation de séquences cibles de sorte que seulement un type ou deux types de triphosphates de désoxyribonucléotides sont nécessaires pour remplir les doubles espaces vides, chacun ayant une longueur de 1-10 bases, de préférence 1-3 bases. Des sondes ayant des séquences spécifiques sont revendiquées pour un certain nombre d'agents pathogènes.