重组人白细胞介素2制备工艺

摘要

一种适用于治疗人体疾病的重组白细胞介素2制备工艺，其特点是先进行工程菌发酵，发酵后收集菌体，然后将菌体裂解，采用盐酸胍变性剂进行抽提，且产品纯化，在盐酸浓度为3—6摩尔时凝胶层析，用还原型和氧化型谷胱甘肽复性，乙腈梯度洗脱，收集活性峰，低温减压下快速去除乙腈，即得到rIL—2纯品。本发明具有工艺流程简单、成品纯度高、毒性低、质量稳定等特点。

主权项

1、一种适用于治疗人体疾病的重组白细胞介素2制备工艺，其特征是：(1)、挑单菌落接种于装有LB培养基的摇瓶中，在30℃下振荡培养8-10小时，转入含有合成培养基的发酵罐中，30℃下培养11-13小时，再在42℃下培养5-6小时，发酵后收集菌体；(2)、取菌体，用PH8.5，浓度为50毫摩尔TrisHCl-1毫摩尔EDTA-1毫摩尔DTT缓冲液洗两遍，沉淀物再悬于同样缓冲液中，加溶菌酶，4℃下作用30分钟，冰溶超声至完全破裂为止，离心除去可溶性杂质，沉淀悬于PH8.5，浓度为50毫摩尔TrisHCl-1毫摩尔EDTA-2毫摩尔DTT，搅拌下缓慢滴加同体积的PH8.5，浓度为50毫摩尔TrisHCl-1毫摩尔EDTA-8摩尔尿素，室温下缓慢搅拌20-40分钟，离心除去可溶性杂质，沉淀再用缓冲液洗两遍，再将沉淀溶于PH8.5，浓度为50毫摩尔TrisHCl-10毫摩尔EDT-7至8摩尔GuHCl，溶于1.5小时后离心取上清在4℃保存；(3)、a、凝胶层析：取上清装入sephacrylus-200中，用PH8.5，浓度为50TrisHCl-3至6摩尔GuHCl充分平衡后上样，平衡液洗脱，结果出现三个蛋白峰，收集第三峰、4℃保存；b、复性：取凝胶层析后样品，用浓度为50毫摩尔TrisHCl稀释三倍，加氧化和还原型谷胱甘肽，至1毫摩尔和5-10毫摩尔，调PH值，使为7-9，室温放置2小时，浓缩至10倍，过sephadex G25柱，用PH3.0，浓度为0.1摩尔GlyHCl平衡并洗脱，收蛋白峰；c、高效液相层析：用HPLC仪进行纯化，以0.1%三氟乙酸平衡C8反相柱后，泵入rIL-2样品，进行乙睛梯度洗脱，收集活性峰，低温减压下快速去除乙睛，即可得到rIL-2纯品。