| 主权项 |
1.一种供需要癌症治疗之病人治疗癌症之医药组 合物,其包含 (1)下式之FPT抑制剂 (+)-对映异构物 其中FPT抑制剂之投药量为1.4至400毫克/日; 及 (2)额外Ras发讯径路抑制剂,其投药量为1至350毫克/ 日。 2.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中额外Ras 发讯径路抑制剂为激抑制剂。 3.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中额外Ras 发讯径路抑制剂可抑制于Ras发讯径路于Ras下游的 元体。 4.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中额外Ras 发讯径路抑制剂为MEK抑制剂。 5.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中额外Ras 发讯径路抑制剂为生长因子受体抑制剂。 6.如申请专利范围第5项之医药组合物,其中生长因 子受体抑制剂为酪胺酸激抑制剂。 7.如申请专利范围第6项之医药组合物,其中酪胺酸 激抑制剂为小分子选自由(1)erbB2受体,(2)PDGF受体 抑制剂,(3)IGF受体抑制剂,及(4)EGF受体酪胺酸激 抑制剂组成的组群。 8.如申请专利范围第5项之医药组合物,其中生长因 子受体抑制剂为针对生长因子受体胞外领域之抗 体。 9.如申请专利范围第8项之医药组合物,其中抗体为 锁定erbB2受体为目标的单株抗体,或锁定EGF受体为 目标的单株抗体。 10.如申请专利范围第8项之医药组合物,其中抗体 为锁定erbB2受体为目标的单株抗体。 11.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中FPT抑 制剂之投药量为3.5至70毫克/日。 12.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中额外 Ras发讯径路抑制剂之投药量为3.5至70毫克/日 13.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中FPT抑 制剂与额外Ras径路抑制剂系同时投药。 14.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中FPT抑 制剂与额外Ras径路抑制剂系循序投药。 15.如申请专利范围第14项之医药组合物,其中额外 Ras径路抑制剂系首先投药。 16.如申请专利范围第14项之医药组合物,其中FPT抑 制剂系首先投药。 17.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中癌症 为:肺癌,胰脏癌,结肠癌,卵巢癌,肝癌,骨髓性白血 病,黑素瘤,甲状腺滤泡癌,膀胱癌,神经胶瘤,脊髓 发育不全症候群,乳癌或摄护腺癌。 18.如申请专利范围第1项之医药组合物,其中癌细 胞死亡系经由细胞凋零程序(apoptosis)发生。 图式简单说明: 图1:Ras讯号转导:Ras/MAPK讯号转导径路各组成元体 之示意代表图。此种由生长因子受体至ERK活化的 直线径路为首先将说明的Ras媒介径路。也指示由 各种抑制剂锁定目标之步骤,包括FPT抑制剂SCH 66336 及MEK抑制剂PD098059及U0126。 图2:使用PD098059治疗之剂量关联凋零程序反应可藉 添加SCH 66336而增进:H-Ras-CVLS-转形Rat2细胞单独或合 并SCH 66336使用指示浓度的PD098059(A385-023-M005;亚力 士(Alexis)公司)处理36小时。细胞藉胰蛋白/EDTA处 理收获,固定于丙酮/甲醇(50%:50%)于-20℃历30分钟, 彻底以PBS洗涤,以及使用含75微克/毫升碘化丙基 (PI;卡百坎(Calbiochem);加州,拉荷拉)及500微克/毫升 RNase(西格马(Sigma);蒙大拿州,圣路易)之PBS于室温标 记30分钟。藉碘化丙基染色染色体DNA使用FACS分 析细胞族群(FACS-凯利白(Calibur),贝坦-狄金森(Becton- Dickinson);加州,山景市)测量凋零程序。于有(▲)或 无(■)100 nM SCH 66336存在下,PD098059浓度由0.25变化至 20M。 图3:使用SCH 66336治疗之剂量关联凋零程序反应可 藉添加PD098059而增进:H-Ras-CVLS转形Rat2细胞使用指 示浓度的SCH 66336单独或并用PD098059处理36小时。如 上图2所述进行分析。于有(▲)或无(■)2.5M PD 098059存在下,SCH 66336浓度由0.0125变化至0.75M。 图4藉FACS测量SCH 66336及U0126对细胞凋零程序的影响 :H-Ras-转形Rat2细胞于有或无0.5M SCH 66336存在下使 用0至10M U0126(#V1121;波密加(Promega)公司;威斯康辛 州,麻里森)处理24小时。如图2的图说进行分析。1= 未经处理细胞;2 = SCH 66336;3 = 1M U0126;4 = lM U0126 +SCH 66336;5=5M U0126;6=5M U0126+SCH 66336;7=10M U0126; 8=10M U0126 + SCH 66336。 图5:藉卡斯伯(Caspase)活化测量SCH 66336及PD098059对 凋零程序的影响:H-Ras-转形Rat2及亲代Rat2细胞使用 20M PD098059,0.5M SCH 66336或两种药物的组合治疗 24小时。细胞于科隆特(Clontech)公司推荐的清洁剂 缓冲液(阿波-亚勒特Apo-Alert)CPP32/卡斯伯-3检定 分析)溶解,及于4℃于14,000 rpm离心15分钟使细胞碎 屑形成丸粒。所得上清液之蛋白质浓度系藉BCA蛋 白质检定分析(皮尔斯(Pierce);伊利诺州,洛克福)测 量,藉萤光计量术(塞托福洛(CytoFluor)板阅读机;透 视生物系统公司;麻省,伯明罕)使用萤光生成性 基质(AC-DEVD-AMC;科隆特;加州,佩罗艾托)使用175微 克溶解产物检定分析卡斯伯-3活性。1=未经处理 H-ras细胞;2=H-ras细胞+SCH 66336;3=H-ras细胞+PD09059;4=H- ras细胞+SCH 66336+PD 098959;5=未经处理Rat2细胞;6=Rat2细 胞+SCH 66336;7=Rat2细胞+PD 09059;8=Rat2细胞+SCH 66336+PD 098959。 图6:SCH 66336及PD098059对ERK1及ERK2磷酸化作用的影响: H-Ras-转形Rat2细胞使用20M PD098059或0.5M SCH 66336 处理0至36小时。细胞于清洁剂缓冲液内溶解,且于 4℃于14,000 rpm离心15分钟而将细胞碎屑形成丸粒。 所得上清液之蛋白质浓度系藉BCA蛋白质检定分析( 皮尔斯(Pierce);伊利诺州,洛克福)测定。细胞蛋白 质(20微克)系藉8-16% Tris-甘胺酸聚丙烯醯胺凝胶电 泳(诺维斯(Novex);加州,圣地牙哥)分离。然后蛋白 质移至PVDF膜进行西方墨点分析。ERK1及ERK2使用磷 酸化p42/44 MAPK蛋白质之特异性免多株抗体(磷-Thr202 /Tyr204特异性;#9101;新英格兰,生物实验室;麻省,贝 佛利)检测。全部ERK1及ERK2系使用p42/44MAPK蛋白质之 特异性免多株抗体(#9102;新英格兰,生物实验室;麻 省,贝佛利)检测。两种抗体皆使用山羊抗-小鼠-HRP 抗体(辣根过氧化;西麦空(Chemicon);加州,特明库 拉)辨识且藉提升化学发光观察(超信号西方皮可( Pico)化学发光基质;皮尔斯;伊利诺州,洛克福)。 图7:胞内信号转导径路:图1图解说明由生长因子受 体通过Ras至活化MAPK串级的直线径路。显然发讯径 路由于有多个分支以及交互连结,因此显着更复杂 。部分复杂程度举例说明于图7。 |
