| 主权项 |
1﹒一种经分离的突变型AOX2启动子,其系藉由氮硷 基序列删失,氮硷基 取代或插入而由毕赤酵母菌属之酵母之天然型AOX2 启动子衍生而得者 。 2﹒一种制备一包括申请专利范围第1项之突变型 AOX2启动子之质体之方 法,该方法包括:将一由AOX1基因之表现无法生产AOX 且在染色体 上携有天然型AOX2启动子之微生物种系在含甲醇培 养基中培养以获得 在该培养基中充分增殖之一突变型种系;从该突变 型种系回收一突变型A OX2启动子而将该启动子插入一质体。 3﹒一种制备一表现质体之方法,该方法包括:申请 专利范围第1项之突变型 AOX2启动子及一异种蛋白质之基因之插入,俾该异 种蛋白质基因能以 可作业方式与该突变型AOX2启动子联结。 4﹒如申请专利范围第3项之方法,其中该异种蛋白 质为人类血清白蛋白。 5﹒一种生产异种蛋白质之方法,该方法包括培养 一包括由申请专利范围第2 -4项中任一项之方法所制质体之转形寄主,其中该 转形寄主包括表现质 体,此表现质体包括适于该异种蛋白质之一基因, 此基因以可作业方式与 突变型AOX2启动子联结。 6﹒如申请专利范围第1项之启动子,含该启动子酵 母于甲醇存在下之生长速 率比野生型醇母于甲醇下之生长速率快。 7﹒如申请专利范围第1项之启动子,带有选自序列 监识编号:2,序列监识 编号:3或序列监识编号:4中之任一序列。 8﹒一种获得微生物种系之方法,该微生物种系于 其染色体上携有可在单独突 变型AOX2启动子控制下表现的AOX2基因;该方法包括 于含甲醇之 培养基内培养一种微生物种系,此微生物种系于其 染色体上携有处于天然 型AOX2启动子之控制下的AOX2基因;及分离该微生物 种系。 9﹒一种生产异极蛋白质之方法,该方法包括培养 由申请专利范围第8项之方 法所得之微生物种系,其中该种不包括一表现质体 ,此质体包括适于该异 极蛋白质之一基因,此基因以可作业方式与一启动 子联结。 10﹒如申请专利范围第9项之方法,其中之微生物种 系为毕赤醏母菌属之酵 母。图示简单说明: 第1图示例说明PC4130之构筑计划及 GCPl01之获得方法。第1图中," prom" 代表启动子, "t "代表终结子,而" po1yA"代表po1yA区。 第2图描绘AOX2基因附近之限剪|06图 谱。括弧内之数字分别代表距Xbal址(距 离0)之距离( X l00氮硷基)。 第3图描绘其中之AOX2启动子已经被 选殖的质体pMM030及甽pMM034,各别附有限 剪|06图谱。括弧内之数目分别代表距 EcoRl址(距离0)之距离( X l00氮硷 基)。 第4图描绘其中之AOX2启动子已经被 选殖的质体pMM031及pMM035,各别附有限 剪|06图谱。括弧内之数目分别代表距 EcoRl址(距离0)之距离( x l00氮硷 基)。 第5图示例说明整合媒介, pY1066及 pYI068,之构筑,供引发AOX2启动子序列 之转形。第5图中,“BAP"代表细菌硷 性磷酸|06而: AOX2 prom"代表AOX2启动 子。 第6图显示获得带有突变型AOX2启动 子之各动系之方法。 第7图示例说明pPGO01之构筑。第7 图中,"P"代表启动子而"t "代表终 结子。 第8图示例说明质体pMM041及pMM042 之构筑,此种质体可供于AOX2启动子之控 制之下表现HSA。 第9图说明实施例7之程序。第9图 中,“| "代表探针10.6kb KpnI段), “pr"代表AOX2启动子,而"| "代表 Bgl II割裂址。 |
