| 主权项 |
1﹒一种获得基本上没有不要的污染物的热稳定连 接的方法,包括:(a) 提供一种经重组之嗜中温宿主细胞,以表现编码异 源热稳定性DNA连接 之基囚,该异源热稳定性DNA通接系源自下列群 体之嗜热菌:浅黄 嗜热菌(ThermusFLarus)、罗伯嗜热菌(ThermUS RUBER)、好热嗜热菌(ThermUSTHermophilus )、嗜热脂肪芽孢杆菌(BaciIlus一STEAROTTHERM OPHILUS)、水生嗜热菌(THERMUSAQUATCUS)、 乳嗜热菌(THERMUSLACTEUS)、赤嗜热菌(Thermu srubens)及嗜热甲烷嗜热菌(MethanNOTHERrmU SFERVIDUS);(B)在含有不要的污染物之混合物中培养 该嗜 中温宿主细胞,以制造该热稳定连接;(C)纯化该 热稳定连接;该 纯化过程包含至少一个步骤,其中含该不要的污染 物之混合物被加热至6 5℃至100℃之间其中在培养后,该嗜中温宿主细胞 溶解而得台右该熟 稔定连接的溶菌物。 3﹒根据申请专利范围第1项的方法,其中热纯化过 程包含加热该含有不要的 污染物之混合物,以从含有热稳定连接酌的液体中 使该不要的污染物本质 上完全沈淀。 4﹒根据申请专利范围第3项的方法,其中热不要的 污染物包含蛋白质,而该 加热使该蛋白质变性,并使其沈淀。 5﹒根据申请专利范围第1项的方法,其中热稳定连 接催化核酸之代谢、修 饰、或核酸上之作用。 6﹒根据申请专利范围第1或4项的方法,其中该不要 的污染物为核酸内切 、核酸外切或蛋白。 7﹒根据申请专利范围第1项的方法,其中热稳定连 接是源自一嗜热菌(T hermUSthermophiluS)之DNA连接。 8﹒根据申请专利范围第1项的方法,其中温度是由 80℃至约95℃。 9﹒一种分析依赖NDA的热稳定核酸连接活性之方 法,包括:(a)提供 衍自NDA之经标帜的腺核基部分;(B)形成该连接 与该经标帜之 腺核部分的稳定共价AMP加合物;(C)加热至65℃-100 ℃而 将污染物变性,测定该经标帜之加合物。 10﹒根据申请专利范围第9项的方法,其中该连接的 是一种嗜热连接, 且该连接活性是于含有不要的污染物样品中被 侦测,该方法包含加热 含有该连接和该不要的污染物之混合物,于致使 不要的污染物,但不 致使该连接变性或失活性之温度。 11﹒一种选殖编码核酸连接活性的核酸之方法, 其中核酸片段库彼转形宿 主细胞,且以申请专利范围第9或10项之方法筛选该 转形宿主细胞而 检定表现车接活性的细胞,12﹒一种本质上纯的 核酸序列,其为编 码种热稳定核酸连接之基因,该基因具有如下列 示之核酸序列及其 DNA片段。 13﹒根据申请专利范围第12项之核酸序列其中该基 因是包含一提供该基因 的加强表现之启动子之表现软体之一部份。 14﹒根据申请专利范围第13项上核酸序列,其中该 表现载体是PGL62 8。图示简单说明 图l是图示质体PGL628组成,此质体 含有自BstXl位置延伸至Bglll位置距离 约2.6kb的嗜热热菌(Thermus thermopilus)DNA片段。 图2(附图)是以SDS聚丙烯醯胺胶 6 体电泳法所进行的连接|流份的分析.电 泳是进行在如实例l所述之105聚丙烯| 肢胶(15x20x0.15cm)。胶体以考马斯 亮蓝染色。第l行,蛋白质分子量标准, 分子量以千道耳吞表示,第2行,123微 克之流份I;第3行,15微克之流份Ⅱ; 第4行,12微克之流份Ⅲ;第5行,6微 克之流份Ⅳ;以及第6行,6微克之流份 V。 |
