发明名称 稳定之purA载体及其用途
摘要 本发明是有关一个补偿系统,此系统可用来选择及维持细菌宿主中之表现基因。本发明提出稳定的载体,其可藉 purA(腺酸琥珀酸合成)染色体删除突变之补偿作用而被选择及维持,可免除抗生素耐受基因之使用。此系统可用于发酵中及活疫苗细菌(如经减毒之伤寒沙门氏菌)中有机体之产制。此系统允许染色体整合子之选择,且允许于经免疫宿主中之选择及稳定质体之维持,而毋须应用外部的选择压力。
申请公布号 TW201794 申请公布日期 1993.03.11
申请号 TW081100950 申请日期 1992.02.11
申请人 氰胺公司 发明人 亚吉斯.艾尼利奥尼;詹姆斯.皮.佛吉尼帝;罗伯.纽顿.布雷三世
分类号 C12N7/01;C12N15/54;C12N15/73 主分类号 C12N7/01
代理机构 代理人 陈长文 台北巿敦化北路二○一号七楼
主权项 1﹒一种制备稳定载体之方法,其包含将含有可编 码腺有酸号珀酸合成之p urA基因之DNA嵌入不含抗生素抗药性区域之质体或 噬菌体中。 2﹒根据申请专利范围第1项之方法,其中载体系低 套数质体载体,或高套数 质体,含有向下调控之purA基因。 3﹒根据申请专利范围第1项之方法,其中软体进一 步包括编码至少一个其他 抗原或其片段之核酸序列。 4﹒根据申请专利范围第3项之方法,其中抗原是一 种病毒性抗原,选自下列 包括:人类免疫缺失病毒I及II型),人类T淋巴细胞病 毒(I,II 及III型),呼吸道合胞病毒,A型肝炎、B型肝炎,C型肝 炎非A及 非B型肝炎病毒,单纯泡疹病毒(I及II型)、巨细胞病 毒、流感病毒 、副流感病毒,脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、冠状 病毒,风疹病毒,麻疹 病毒,水痘病毒、爱泼斯坦─巴尔疱疹病毒,腺病 毒,乳头状瘤病毒及黄 热病毒,细菌性抗原选自下列包括:流感嗜血菌,大 肠埃希氏菌、脑膜炎 奈瑟氏球菌,肺炎链球菌、酿脓链球菌、卡它布兰 漠氏球菌,霍乱弧菌白 喉杆菌,砂眼衣原体、淋病奈氏球菌、百日喉博德 特氏菌、缘脓杆菌,金 黄色葡萄球菌,肺炎克氏杆菌及破伤风梭菌,真菌 或寄生虫抗原或温血动 物或人类病原体。 5﹒根据申请专利范围第1项之方法,其中载体系选 自下列包括:pPX30 05(ACCC68451),pPX3006(ACCC68452) ,pPX3009(ACCC68612),pPX3010(ACCC 68453)及pPX3007。 6﹒一种制备重组宿主细胞之方法,其包含以不含 抗生素抗药性区域而含有可 编码腺荷酸琥珀酸合成之异质purA基因之质体或 噬菌体转形沙门氏 菌宿主细胞,其具有purA染色体基因突变,且视所需 的于芳族化合物 生合成中具功能的一个以上基因中有染色体突变 。 7﹒一种制备重组减毒细菌之方法,其包含以不含 抗生素抗药性区域而含有可 编码腺酸琥珀酸合成之异质purA基因之质体或 噬菌体转形减毒沙 门氏菌细胞,其具有purA染色体基因突变,且视所需 的于芳族化合物 生合成中具功能的一个以上基因中有染色体突变 。 8﹒根据申请专利范围第7项之方法,其中质是低套 数质体,或高套数质体, 含有向下调控之purA基因。 9﹒根据申请专利范围第7项之方法,其中基因产物 是源自病毒、细菌、真菌 或寄生虫之温血或人类病原体之基因产物。 10﹒根据申请专利范围第7项之方法,其中质体包括 编码抗原之基因,其系 疟疾环生殖孢子蛋白质之表位,呈融合蛋白质之部 份表现,包括环生殖 孢子表位及大肠杆菌热不安定性肠毒素之─亚 单元,或其部份蛋白质 ,其加上环生殖孢子表位以产生无疾活性之融合蛋 白质。 11﹒一种利用非抗生素选择手段选择及维持有兴 趣之细菌转形体之方法,此 方法包括将一个稳定的purA载体嵌入缺乏purA基因 之宿主细菌 中,于缺乏腺嘌呤之培养基中选择性培养该细菌, 并选出于其上生长之 含purA质体之细菌菌落。 12﹒一种制备疫曲组合物之方法,其包含混合一种 根据申请专利范围第7项 之方法所制备之减毒细菌与一种药学上可接受载 剂。
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