| 主权项 |
1.一种将一特定数目的一被选择基因或一特定DNA 序列整 合至一较佳为肠菌科之细菌(诸如大肠扞菌, Cltrohacter freundii, Erwiniaherbicola,Erwiniachrysanthemi ,鼠伤寒杆菌,宋内氏杆菌,Enterobacter cloacae,灵 杆菌)的DNA序列内之方法,其特征在于:(a)该被选择 基 因或该被选择DNA序列被植入到一转移子且位于该 转移子 的主要部分外,该辖移子因缺乏转移基因 或因其 内转移 基因 之基因表现被抑制而为不健全的且因此无法 进行转 移,以及该转移子系择自Mud Ⅰ与Mud Ⅱ噬菌体;(b)该 转移子被整合至该细菌的DNA序列内;(c)该不健全的 转移 子被互补之;以及(d)藉由在一选择培养基内进行细 胞培 养而可获得其内互补作用已在一特定数目的转移 后被终止 的细菌,该选择培养基对应于一位在该转移子内之 可选择 基因。2.如申请专利范围第1项之方法,其中该转移 子不具有码 编其转移基因醇之基因。3.如申请专利范围第1项 之方法,其中另不健全转移子被 整合至其内植入有另一被选择基因或特定DNA序列 者,该 另一被选择基因或特定DNA序列被互补之以产生一 特定数 目的转移。4.如申请专利范围第3项之方法,其中该 转移子藉由该细 菌被一可表现转移基因醇之质体性状转变或藉由 一可表现 转移基因之噬菌体的性状导引而被互补之。5.如 申请专利范围第3项之方法,其中该转移子系在抑 制 子失去活性引起转移基因的基因之表现后才被活 化。6.如申请专利范围第1项之方法,其中该转移子 亦码编一 可选择基因。7.如申请专利范围第6项之方法,其中 该可选择基因系一 在该细菌内被基因表现的抗生素-抗性基因。8.如 申请专利范围第6项之方法,其中该转移之数目系 藉 由测定该可选择基因的基因表现予以评占之。9. 如申请专利范围第8项之方法,其中当该可选择基 因为 一抗生素-抗性基因时该可选择基因的基因表现系 藉由对 该抗生素之抗性而测定之。10.如申请专利范围第8 项之方法,其中当该可选择基因( 诸如1dc操纵子)之基因产物可藉由一呈色标记来观 察时该 可选择基因的基因表现系藉由一取代物之呈色而 测定之。11.如申请专利范围第1项之方法,其中:该 宿主细菌内之 该被选择基因及其活化的启动子被植入一缺乏转 移基因 的基因之Mud Ⅰ或Mud Ⅱ噬菌体且位于该转移子之 非主要 部分内;该转移子被整合至一可相容的宿主之染色 体内; 该转移子藉由该宿主为一码编转移基因 的质体所 性状转 变或为Mu噬菌体所感染而被互补之;在一特定数目 之转移 后,筛选自然恢复的菌株(无质体或Mu噬菌体)。12. 如申请专利范围第1项之方法,其中该被选择的基 因系 源自L-苏胺酸的生物合成之一或数个基因。13.一 种用以生成一新细菌菌株之方法,其包括施行申请 专利范围第1项之方法。14.如申请专利范围第13项 之方法,其中所生成的细菌菌 株能够产生大量的苏胺酸且于其染色体内含有一 转移子的 数个复制体,该转移子内含有全部或部分源自L-苏 胺酸的 生物合成之基因。15.如申请专利范围第14项之方 法,其中所生成的细菌系 一大肠杆菌菌株。16.如申请专利范围第1项之方法 ,其中该被选择的基因系 码编一胜 或一蛋白质。17.一种用以制备一被选择 基因的表现产物之方法,其包 括藉由在一适当的细胞培养基内培养依据申请专 利范围第 13,14或15项的方法所生成之细菌以及回收该产物。 18.如申请专利范围第17项之方法,其中该表现产物 系一 胜 或一蛋白质。19.如申请专利范围第1项之方法, 其中该基因或该DNA序 |
