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1912331.一种制备一码编一杂种多胜 生长因子之DNA 序列的方法,其包括: a)藉由核 酸残基之序列式增 加来化学合成该码编杂种多胜 生长因子之DNA序列 ,该杂种多胜 生长因子(1)可与一表皮生长因子(EGF) 受器结合,(2)具有和一可结合EGF受器的天然发生的 生长因子(天然配合体)实质上相同的环结构,以及( 3)与该天然配合体具有至少约30%的同源性,其中该 多杂种胜 包括三个领域,其各自为一个和一相同 或相异的天然配合体之一片段具有至少约30%的同 源性之胺基酸序列,且与该天然配合体片段具有相 同的相关位置,以及其中该DNA片段不码编一天然配 合体,该等领域之定义口如下: 一个具有至少约11 个N-端胺基酸的第一领域,约始于胺基酸aa-6以至aa- 1并终止于胺基酸aa11以至aa15,其包括一如下之胺基 酸残基序列: 一个具有至少约11个中央片段胺基酸 的第二领域,约始于胺基酸aa11以至aa15并终止于胺 基酸aa25以至aa29,其包括一如下之胺基酸残基序列: 一个具有至少约14个C-端胺基酸的第三领域,约始 于胺基酸aa25以至aa29并终止于胺基酸aa40以至aa53, 其包括之如下之胺基酸残基序列:其中码编胺基酸 残基之各个密码子系经过择取以供于一选定的细 菌宿主细胞内被高度基因表现之。2.如申请专利 范围第1项之方法,其中该DNA序列进一步码编一连 接至该第一领域之胺基端的第四领域,该第四领域 具有至少约6个N-端之外的胺基酸,约始于胺基酸aa- 7以至aa-1并终止于胺基酸aa-45以至aa-7,其包括一如 下之胺基酸残基序列:但有个条件是当该杂种多胜 具有一同于一天然配合体之胺基酸序列,一码编 该第四领域之DNA序列存在且其码编该天然配合体N -端之外的其他胺基酸。3.如申请专利范围第2项之 方法,其中该DNA序列进一步码编一插入在该第四领 域的C-端处可被选择性地切开之胺基酸序列,其中 该胺共酸序列为Asp-Pro或Met-X,其中X系任一胺基酸 残基。4.如申请专利范围第1.2或3项之方法,其中该 天然配合体为牛痘病毒生长因子(VGF),转形生长因 子-(TGF-),黏液瘤生长因子(MGF),表皮生长因子( EGF),萧普纤维瘤生长因子(SFGF)或两性调节素( amphiregulin)。5.如申请专利范围第1项之方法,其中 该CNA序列进一步码编一连接至该第一领域之胺基 端的引导序列,其中该引导序列系N-蛋白、cro- 蛋白或两性调节素之一N-端片段或为一信号序列( 包括一硷性磷酸 信号序列、猿类TFGF- 1信号序列 或-K.lactis杀手毒素信号序列)。6.如申请专利范围 第5项之方法,其中该CNA序列进一步码编一插入在 该引导序列的C-端处可被选择性地切开之胺基酸 序列,其中该胺基酸序列为Asp-Pro或Met-X,其中X系任 一胺基酸残基。7.如申请专利范围第2或3项之方法 ,其中该CNA序列进一步码编一连接至该第四领域之 胺基端的引导序列,其中该引导序列系N-蛋白、 cro-蛋白或两性调节素之-N-端片段或为一信号序 列(包括一硷性磷酸信号序列、猿类TFGF-1信号序 列或一K.lactis杀手毒素信号序列)。8.如申请专利 范围第7项之方法,其中该CNAC序列进一步码编一插 入在该引导序列的C-端处可被选择性地切开之胺 基酸序列,其中该胺基酸序列为Asp-Pro或Met-X,其中X 系任一胺基酸残基。9.如申请专利范围第1.2或3项 之方法,其中该等领域中至少有一者和VGF,TFG-EGF 或SFGF之一片段具有至少约30%的同源性。10.如申请 专利范围第1.2或3项之方法,其中该序列包括至少 一个源目码编天然配合体的变化因而导致下列胺 基酸序列中的变化:HisGlyAsp至HisGlyThr;GlyMetTyrCys至 GlyTyrAlaCys;ArgCysSer至ValCysSer;CysLeuHisAspCys至 CysLeuHisGlyThrCYS;以及GlyMetTyrCysArgCys至GlyTyrAlaCysValCys 。11.一种制备一码编一杂种多胜 生长因子之DNA序 列的方法,其包括: a)藉由核 酸残基之序列式增加 来化学合成该码编杂种多胜 生长因子之DNA序列, 该杂种多胜 生长因子包括三个领域,该等领域各 个实质上至少相应于一可结合EGF受器之天然发生 的生长因子(天然配合体)之一片段且与该天然配 合体片段具有相同的相关位置,以及其中该DNA片段 不码编一天然配合体,该等领域之定义如下: 一个 具有至少约11个N-端胺基酸的第一领域,约始于胺 基酸aa-6以至aa-1并终止于胺基酸aa11以至aa15,其包 括一如下之胺基酸残基序列: 一个具有至少约11个 中央片段胺基酸的第二领域,约始于胺基酸aa11以 至aa15并终止于胺基酸aa25以至aa29,其包括一如下之 胺基酸残基序列: 一个具有至少约14个C-端胺基酸 的第三领域,约始于胺基酸aa25以至aa29并终止于胺 基酸aa40以至aa53,其包括一如下之胺基酸残基序列: 其进一步码编一连接至该第一领域的胺基端,具有 约8至45个N-端胺基酸之引导序列,该引导序列源自 于噬菌体N-蛋白质,噬菌体Cro蛋白质,两性调节 素,一细菌性硷性磷酸 信号序列之T4基因32。12.如 申请专利范围第11项之方法,其中该DNA序列进一步 码编一插入在该引导序列的C-端以及该杂种多胜 之胺基端处可被选择性地切开之胺基酸序列,其中 该胺基酸序列为Asp-Pro或Mer-X,其中X系任一胺基酸 残基。13.如申请专利范围第11或12项之方法,其中 该引导序列系约为N-蛋白之N-端胺基酸的32至33个 胺基酸。14. |
