RECOMBINANT NEGATIVE STRAND RNA VIRUS EXPRESSION SYSTEMS AND VACCINES.

摘要

On décrit des modèles d'ARN recombinant à brin négatif utilisables pour l'expression de produits génétiques et/ou pour la construction de virus chimériques. On a utilisé du polymérase viral grippal, déplété à la préparation d'ARN viral, pour copier de petits modèles d'ARN préparés à partir de séquences codées de plasmide. On a démontré que des constructions de modèle comportant seulement l'extrémité terminale 3' d'ARN génomique ont été copiées de façon efficace, ce qui indique que le promoteur est resté seulement dans l'extrémité terminale 3' du nucléotide 15. Des séquences non spécifiques aux extrémités terminales virales grippales n'ont pas été copiées, et, ce qui est surprenant, des ARNs comportant des extrémités terminales identiques à celles provenant d'ARNc codant plus ont été copiées à des niveaux bas. La spécificité pour la reconnaissance du promoteur virus codant a été définie davantage par une mutagénèse spécifique au site. On a également trouvé que des niveaux accrus de protéine virale étaient nécessaires pour catalyser la synthèse d'ARN sans amorceur et la synthèse d'ARN amorcé d'endonucléase cap à partir desdits modèles ainsi qu'à partir d'ARNs de longueur génomique. Ceci suggère que ledit système reconstitué présente des caractéristiques de catalyseur sensiblement semblables à celles de PRNs virales natives. On a obtenu des niveaux élevés d'expression d'un gène hétérologue utilisant les constructions et les méthodes décrites.