发明名称 TGF– 1/ 2:新颖嵌合型转化生长因子–
摘要 本发明系关于新颖嵌合型TGF-β(称为TGF-β1/β2)之大量产制,其系藉含有TGF-β1/β2先质编码序列且受表现调节单元控制之重组DNA载体转感染之真核宿主细胞产制。改变猿TGF-β1 cDNA〔夏普(Sharples)等人,1987年, DNA第6期第 239-244页〕以使成熟TGF-β1序列中编码第9-13,17,19,25及26胺基酸残基之核酸改变成为编码成熟TGF-β2结构之对应胺基酸之核酸。此仍保持猿密码子用途。构筑在猿病毒40(SV 40)表现调节单元之调节控制下编码嵌合型TGF-β1/β2先质之表现载体并用其转感染田鼠卵巢(CHO)细胞。所得到的CHO转感染物可合成及分泌高浓度之成熟TGF-β1/β2。TGF-β1/β2表现可以胺基甲基叶酸(methoterexate)扩增,经扩增之转感染物(transfectants)可分泌成熟TGF-β1/β2达1毫克/升。酸化CHO转感染物之条件培养基可产生最大量具生物活性之TGF-β1/β2。咸信转感染CHO细胞分泌高浓度的成熟TGF-β1/β2系由于嵌合型先质蛋白质之蛋白质分解过程具不寻常效率所造成。此种增加之分解效率又系由于本案申请人在成熟TGF-β结构之胺基-终端区域中组TGF-β1及TGF-β2胺基酸序列而产生之结构特征造成。
申请公布号 TW182614 申请公布日期 1992.04.21
申请号 TW078109786 申请日期 1989.12.18
申请人 翁柯根合夥事业 发明人 安东尼.福.波乔;琳达.马迪森
分类号 C07K7/10;C12N15/19;C12P21/02 主分类号 C07K7/10
代理机构 代理人 陈长文 台北巿敦化北路二○一号七楼
主权项 1.一种成熟型嵌合型转化生长因子-1/2,其系实 质上 如下列图1所示第279号胺基酸至第390号胺基酸残基 之胺 基酸序列2.一种先质型嵌合型转化生长因子-1/ 2,其系实质上 如图1所示第1号胺基酸至第390号胺基酸残基之胺 基酸序 列。3.一种成熟型嵌合型转化生长因子-1/2之 核 酸序列 ,其系实质上如图1所示第836号核 酸残基至第1170号 核 酸残基之核 酸编码序列。4.一种先质型嵌合型转 化生长因子-1/2之核 酸序列 ,其系实质上如图1所示第1号核 酸残基至第1170号 核 酸残基之核 酸编码序列。5.一种成熟型嵌合型转 化生长因子-1/2之制法,其包 含:(a)培养一宿主细胞,其含有成熟型嵌合型转化 生长 因子-1/2之核 酸序列,该序列包含实质上如图1 所 示之第836号核 酸至第1170号核 酸,在调节基因表现 之第二种核 酸序列之控制下,此宿主细胞可产生 具有成 熟型嵌合型转化生长因子-1/2活性之 或蛋白 质;及 (b)从培养物中回收此成熟型嵌合型转化生长因子- 1/ 2,其中该宿主细胞系中国田鼠卵巢细胞,该调节基 因表 现之第二种核 酸序列由一SV40启动子及可选择标 记二氢 叶酸还原 之编码序列所组成,以致该含成熟型嵌 合型转 化生长因子-1/2编码序列之宿主细胞可以监定 。6.一种先质型嵌合型转化生长因子-1/2之制 法,其包 含:(a)培养一宿主细胞,其含有先质型嵌合型转化 生长 因子-1/2之核 酸序列,该序列包含实质上如图1 所 示之第1号核 酸至第1170号核 酸,在调节基因表现 之 第二种核 酸序列之控制下,宿主细胞可产生具有 先质型 嵌合型转化生长因子-1/2活性之 或蛋白质;及( b) 从培养物中回收先质型嵌合型转化生长因子-1/ 2,其 中该宿主细胞系中国田鼠卵巢细胞,该调节基因表 现之第 二种核 酸序列由一SV40启动子及可选择标记二氢 叶酸还 原 之编码序列所组成,以致该含先质型嵌合型转 化生长 因子-1/2编码序列之宿主细胞可以监定。7.根 据申请专利范围第5或6项之制法,尚包含将宿主细 胞 暴露于胺基甲基叶酸(methotrexate)中,以选取含有扩 增 量之二氢叶酸还原 及嵌合型转化生长因子,-1/ 2之 编码序列之抗性集落。8.一种嵌合型转化生长因 子-1/2之制法,其包含:(a )培养存于美国类型培养收集所及登录号为第CRL 9959号之 转感染物CHO-5 41, 2.5 CL 5;(b)从培养物中回收嵌 合型转化生长因子-1/2。9.根据申请专利范围 第8项之制法,其中转感染物系在胺
地址 美国