绒毛、蜕膜制人神经生长因子的方法

摘要

本发明涉及绒毛、蜕膜制人神经生长因子的方法，以人体胚胎绒毛、蜕膜为原料，通过匀浆、冻融、酶解、离心分离、超滤、透析、解聚、二次离子交换层析分离及一次分子筛吸附分离等步骤除净杂蛋白，提纯得符合人体需要的人神经生长因子。本法原料来源广，制备工艺简单，成本低，制得的人神经生长因子无异性蛋白，对人体使用安全，无毒副作用，具有促进神经节神经纤维生长活性，临床用于老年痴呆症、脑发育不良及脑血管疾病等，有一定疗效。

主权项

1、绒毛、蜕膜制人神经生长因子的方法，其特征是以人胚胎绒毛、蜕膜为原料，制备步骤如下：(1)、将绒毛、蜕膜除血匀浆；(2)、将匀浆后物料在低温下冻结，随后在＜38℃的室温下融化、重复冻融至细胞壁完全破裂；(3)、将步骤(2)的物料加入C—6885胶原酶酶解；(4)、将步骤(3)所得物料离心分离除去固体杂质，收集上清液；(5)、将步骤(4)的上清液用30000超滤膜超滤除去分子量＞30000的杂蛋白；(6)、将步骤(5)所得物料用10000超滤膜超滤除去分子量＜10000的杂蛋白；(7)、将步骤(6)所得物料用pH＝6.8—7.2的磷酸盐缓冲液透析；(8)、将步骤(7)透析至pH＝6.8—7.2的物料移入离子交换纤维素层析柱，用pH＝6.8—7.2的缓冲液冲洗柱子，将洗下的物料依次接收于若干个容器中；(9)合并收集步骤(8)中波长为280nm，吸收值＞0.5的物料；(10)在步骤(9)所收集的物料中加入pH＝4的醋酸盐缓冲液混匀，将—NGF二聚体解聚成单体，其中醋酸盐缓冲液加入量是物料体积的0.1—0.13倍；(11)将解聚后物料用醋酸盐缓冲液校正至pH＝3.8—4.2，入离子交换纤维素层析柱，按下列程序洗柱：a、用pH＝3.8—4.2的含NaCl的醋酸盐缓冲液洗脱未被吸附的杂蛋白；b、用pH＝8.5—9的Tris—HCl缓冲液洗去另一部分杂蛋白；c、用pH＝8.5—9的含NaCl的Tris-HCl缓冲液洗柱，收集洗脱液；(12)将步骤(11)收集的NGF洗脱液过分子筛柱，用pH＝8.5—9的含NaCl的Tris—HCl缓冲液洗柱，收集洗脱液，获人神经生长因子HuNGF。