改进的免疫荧光细胞染色方法

摘要

本发明公开了一种改进的免疫荧光细胞染色方法，包括固定/通透、通透、表面染色和核内染色、洗涤、重悬共5个步骤；本发明方法是对eBioscience公司的Foxp3免疫荧光细胞染色方法的改进，将二步多重染色法改为一步多重染色法，同时进行细胞表面染色和核内染色，具有操作简便，染色快速，节约试剂，降低成本等优点，研究显示本发明方法与eBioscience公司方法无显著性差异，可以用于细胞表面和核内同时染色，具有良好的应用前景和推广价值。

主权项

1、改进的免疫荧光细胞染色方法，包括以下步骤：a、固定/通透：在分离的细胞沉淀中，加入固定/通透液，混匀，于温度2-8℃避光孵育30-60分钟；b、通透：在经步骤a固定/通透处理后的细胞悬液中，加入通透液，离心洗涤细胞，弃上清；c、表面染色和核内染色：在经步骤b通透处理后的细胞沉淀中，加入细胞表面抗原的荧光标记抗体和核内抗原的荧光标记抗体，于温度2-8℃避光孵育至少30分钟；同时设阴性同型对照；d、洗涤：在经步骤c染色处理后的细胞悬液中，加入通透液，离心洗涤细胞，弃上清；e、重悬：在经步骤d洗涤处理后的细胞沉淀中，加入流式细胞术染色液，重悬细胞。